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青井 三千代大学院医学研究科 医科学専攻准教授
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■ 論文- Cancer stem cells (CSCs) have been implicated as critical mediators in the progression, chemoresistance and metastatic capabilities of diverse malignancies, including osteosarcoma (OS). The authors have succeeded in generating CSC‑like cells (MG‑OKS) from the OS cell line MG‑63 by transducing defined factors. A significant increase in small proline‑rich protein 1A (SPRR1A) expression, a cross‑linked envelope protein in keratinocytes, was observed in MG‑OKS cells. Therefore, SPRR1A could be involved in tumor initiation, growth and poor OS progression. However, its specific role in OS remains unclear. The present study aimed to evaluate the role of SPRR1A in OS both in vitro and in vivo using MG‑OKS cells. Three experimental groups were established: MG‑OKS cells transfected with SPRR1A small interfering (si)RNA (siMG‑OKS), untransfected MG‑OKS cells and MG‑OKS cells transfected with scrambled siRNA (scMG‑OKS) as controls. SPRR1A expression, morphological changes, cell proliferation and migration were assessed in these groups. RNA sequencing was performed to examine the genetic changes caused by SPRR1A suppression. To evaluate tumorigenicity in vivo, cells from each group were subcutaneously transplanted into the backs of nude mice. Tumor volume and Ki‑67 expression were assessed and compared among the three groups at four weeks post‑transplantation. The siMG‑OKS group exhibited altered cell morphology, reduced cell proliferation and decreased migratory abilities in vitro. RNA sequencing revealed suppression of genes involved in cell adhesion in the siMG‑OKS group. Furthermore, the in vivo tumorigenicity of siMG‑OKS was lower than that of the other two experimental groups. These findings suggest that SPRR1A is one of the key cell adhesion‑related molecules involved in OS progression, potentially serving as a therapeutic target for this refractory tumor. However, further research is needed to fully elucidate the mechanisms by which SPRR1A influences OS pathogenesis and to explore its clinical potential.2025年02月, Oncology reports, 53(2) (2), 英語, 国際誌研究論文（学術雑誌）
- Late-onset hypogonadism (LOH) syndrome is characterized by age-related testosterone deficiency and negatively affects the quality of life of older men. A promising therapeutic approach for LOH syndrome is transplantation of testosterone-producing Leydig-like cells (LLCs) derived from human induced pluripotent stem cells (hiPSCs). However, previous studies have encountered obstacles, such as limited cell longevity, insufficient testosterone production, and inefficiency of differentiation. To address these issues, we developed a novel protocol that includes forced NR5A1 expression, a cytokine cocktail promoting mesoderm differentiation, and a transitional shift from 3D to 2D cultures. The resultant cells survived on culture dishes for over 16 weeks, produced 22-fold more testosterone than the conventional method, and constituted a homogeneous population of LLCs with a differentiation efficiency exceeding 99% without purification. Furthermore, these LLCs were successfully engrafted subcutaneously into mice, resulting in increased serum testosterone levels. Our study will facilitate innovative therapeutic strategies for LOH syndrome.2025年01月, Stem cell reports, 102392 - 102392, 英語, 国際誌研究論文（学術雑誌）
- (公社)日本整形外科学会, 2024年09月, 日本整形外科学会雑誌, 98(8) (8), S1967 - S1967, 日本語
- Elsevier BV, 2024年06月, Regenerative Therapy, 26, 729 - 740研究論文（学術雑誌）
- Elsevier BV, 2024年06月, Journal of Dermatological Science研究論文（学術雑誌）
- (一社)日本性機能学会, 2023年08月, 日本性機能学会雑誌, 38(2) (2), 131 - 131, 日本語LOH症候群に対する新しい再生医療の開発
- (公社)日本整形外科学会, 2023年08月, 日本整形外科学会雑誌, 97(8) (8), S1892 - S1892, 日本語
- (一社)日本抗加齢医学会, 2023年06月, 日本抗加齢医学会総会プログラム・抄録集, 23回, 125 - 125, 日本語男性医学2023 テストステロンを増やすための基礎研究から生活習慣まで ヒトiPS細胞由来Leydig細胞の作製
- Abstract Background Our study and several studies have reported that in some cancers, including pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC), the expression of squamous lineage markers, such as esophagus-tissue-specific genes, correlated with a poor prognosis. However, the mechanism by which the acquisition of squamous lineage phenotypes leads to a poor prognosis remains unclear. We previously reported that retinoic acid signaling via retinoic acid receptor γ (RARγ signaling) determines the differentiation lineage into the esophageal squamous epithelium. These findings hypothesized that the activation of RARγ signaling contributed to acquiring squamous lineage phenotypes and malignant behavior in PDAC. Methods This study utilized public databases and immunostaining of surgical specimens to examine RARγ expression in PDAC. We evaluated the function of RARγ signaling by inhibitors and siRNA knockdown using a PDAC cell line and patient-derived PDAC organoids. The mechanism of the tumor-suppressive effects by blocking RARγ signaling was examined by a cell cycle analysis, apoptosis assays, RNA sequencing and Western blotting. Results RARγ expression in pancreatic intraepithelial neoplasia (PanIN) and PDAC was higher than that in the normal pancreatic duct. Its expression correlated with a poor patient prognosis in PDAC. In PDAC cell lines, blockade of RARγ signaling suppressed cell proliferation by inducing cell cycle arrest in the G1 phase without causing apoptosis. We demonstrated that blocking RARγ signaling upregulated p21 and p27 and downregulated many cell cycle genes, including cyclin-dependent kinase 2 (CDK2), CDK4 and CDK6. Furthermore, using patient-derived PDAC organoids, we confirmed the tumor-suppressive effect of RARγ inhibition and indicated the synergistic effects of RARγ inhibition with gemcitabine. Conclusions This study clarified the function of RARγ signaling in PDAC progression and demonstrated the tumor-suppressive effect of selective blockade of RARγ signaling against PDAC. These results suggest that RARγ signaling might be a new therapeutic target for PDAC.Springer Science and Business Media LLC, 2023年05月, Cancer Cell International, 23(1) (1)研究論文（学術雑誌）
- Elsevier BV, 2023年03月, Stem Cell Reports研究論文（学術雑誌）
- Abstract Background The chorioallantoic membrane (CAM) assay is a well-established technique to evaluate tumor invasion and angiogenesis and may overcome the shortcoming of the patient-derived xenograft (PDX) mouse model. Currently, few reports have described lung cancer invasion and angiogenesis in the CAM assay. We therefore used the CAM assay in the evaluation of lung cancer. Method Lung cancer cell line-derived organoids or lung cancer cell lines were transplanted into the CAM on embryonic development day (EDD) 10, and an analysis was performed on EDD 15. Microscopic and macroscopic images and movies of the grafts on the CAM were captured and analyzed. The relationships between the graft and chick vessels were evaluated using immunohistochemistry. Results We transplanted lung cancer cell lines and cell line-derived organoid into a CAM to investigate angiogenesis and invasion. They engrafted on the CAM at a rate of 50–83%. A549-OKS cells showed enhanced cell invasion and angiogenesis on the CAM in comparison to A549-GFP cells as was reported in vitro. Next, we found that A549-TIPARP cells promoted angiogenesis on the CAM. RNA-seq identified 203 genes that were upregulated more than twofold in comparison to A549-GFP cells. A pathway analysis revealed many upregulated pathways related to degradation and synthesis of the extracellular matrix in A549-TIPARP cells. Conclusions The CAM assay can be used to evaluate and research invasion and angiogenesis in lung cancer. The elevated expression of TIPARP in lung cancer may induce angiogenesis by remodeling the extracellular matrix.Springer Science and Business Media LLC, 2023年02月, Cancer Cell International, 23(1) (1)研究論文（学術雑誌）
- Ewing sarcoma (ES) is an aggressive primary malignant bone tumor that predominantly affects children and young adults. Multimodal treatment approaches have markedly improved the survival of patients with localized ES. However, local recurrence and distant metastasis following curative therapies remain a main concern for patients with ES. Recent studies have suggested that slow‑cycling cells (SCCs) are associated with tumor progression, local recurrence and distant metastasis in various types of cancers. According to the results of these studies, it was hypothesized that SCCs may play a critical role in tumor progression, chemoresistance and local/distal recurrence in patients with ES. The present study applied a label‑retaining system using carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester (CFSE) to identify and isolate SCCs in ES cell lines. In addition, the properties of SCCs, including sphere formation ability, cell cycle distribution and chemoresistance, in comparison with non‑SCCs were investigated. RNA sequencing also revealed several upregulated genes in SCCs as compared with non‑SCCs; the identified genes not only inhibited cell cycle progression, but also promoted the malignant properties of SCCs. On the whole, the present study successfully identified SCCs in ES cells through a label‑retaining system using CFSE. Moreover, to the best of our knowledge, the present study is the first to describe the characteristic properties of SCCs in ES. The findings of this study, if confirmed, may prove to be useful in elucidating the underlying molecular mechanisms and identifying effective therapeutic targets for ES.2022年11月, International journal of oncology, 61(5) (5), 英語, 国際誌研究論文（学術雑誌）
- Objectives Small proline-rich protein 1A (SPRR1A) is recognized as a squamous differentiation marker but is also upregulated in some non-squamous cancers. However, its expression in pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) has not been investigated. This study elucidated the expression of SPRR1A in PDAC and its effect on the prognosis and malignant behavior of PDAC. Methods We examined the SPRR1A expression by immunohistochemistry in 86 surgical PDAC cases and revealed the relationship between its expression and the prognosis of the PDAC patients. Furthermore, we overexpressed SPRR1A in pancreatic cancer cell lines (PK-1 and Panc-1) and assessed the phenotype and gene expression changes in vitro. Results Among the 84 cases, excluding 2 with squamous differentiation, 31 (36.9%) had a high SPRR1A expression. The overall survival (median 22.1 months vs. 33.6 months, p = 0.0357) and recurrence-free survival (median 10.7 months vs. 15.5 months, p = 0.0298) were significantly lower in the high-SPRR1A-expression group than in the low-SPRR1A-expression group. A multivariate analysis indicated that a high SPRR1A expression (HR 1.706, 95% CI 1.018 to 2.862, p = 0.0427) and residual tumor status (HR 2.687, 95% CI 1.487 to 4.855, p = 0.00106) were independent prognostic factors. The analysis of TCGA transcriptome data demonstrated that the high-SPRR1A-expression group had a significantly worse prognosis than the low-SPRR1A-expression group, which supported our data. SPRR1A overexpression in PK-1 and Panc-1 did not result in remarkable changes to in vitro phenotypes, such as the cell proliferation, chemo-resistance, EMT, migration or global gene expression. Conclusion Increased expression of SPRR1A is associated with a poor prognosis in PDAC and may serve as a novel prognostic marker. However, our in vitro study suggests that the SPRR1A expression may be a consequence, not a cause, of the aggressive behavior of PDAC.Public Library of Science (PLoS), 2022年05月, PLOS ONE, 17(5) (5), e0266620 - e0266620, 英語, 国際誌研究論文（学術雑誌）
- Intestinal metaplasia is related to gastric carcinogenesis. Previous studies have suggested the important role of CDX2 in intestinal metaplasia, and several reports have shown that the overexpression of CDX2 in mouse gastric mucosa caused intestinal metaplasia. However, no study has examined the induction of intestinal metaplasia using human gastric mucosa. In the present study, to produce an intestinal metaplasia model in human gastric mucosa in vitro, we differentiated human-induced pluripotent stem cells (hiPSC) to gastric organoids, followed by the overexpression of CDX2 using a tet-on system. The overexpression of CDX2 induced, although not completely, intestinal phenotypes and the enhanced expression of many, but not all, intestinal genes and previously reported intestinal metaplasia-related genes in the gastric organoids. This model can help clarify the mechanisms underlying intestinal metaplasia and carcinogenesis in human gastric mucosa and develop therapies to restitute precursor conditions of gastric cancer to normal mucosa.Elsevier BV, 2022年05月, iScience, 25(5) (5), 104314 - 104314, 英語, 国際誌研究論文（学術雑誌）
- (NPO)日本気管食道科学会, 2022年04月, 日本気管食道科学会会報, 73(2) (2), 165 - 165, 日本語
- Human gastric development has not been well studied. The generation of human pluripotent stem cell-derived gastric organoids (hGOs) comprising gastric marker-expressing epithelium without an apparent smooth muscle (SM) structure has been reported. We modified previously reported protocols to generate hGOs with muscularis mucosa (MM) from hiPSCs. Time course analyses revealed that epithelium development occurred prior to MM formation. Sonic hedgehog (SHH) and TGF-β1 were secreted by the epithelium. HH and TGF-β signal inhibition prevented subepithelial MM formation. A mechanical property of the substrate promoted SM differentiation around hGOs in the presence of TGF-β. TGF-β signaling was shown to influence the HH signaling and mechanical properties. In addition, clinical specimen findings suggested the involvement of TGF-β signaling in MM formation in recovering gastric ulcers. HH and TGF-β signaling from the epithelium to the stroma and the mechanical properties of the subepithelial environment may influence the emergence of MM in human stomach tissue.Elsevier BV, 2022年02月, Stem Cell Reports, 17(4) (4), 820 - 834, 英語, 国際誌研究論文（学術雑誌）
- The Endocrine Society, 2021年12月, Endocrinology, 162(12) (12)
Abstract Late-onset hypogonadism (LOH) syndrome, due to a partial lack of testosterone, decreases the quality of life of older men. Testosterone is mainly secreted by Leydig cells in the testes. Leydig cell transplantation is expected to be a promising alternative to conventional testosterone replacement therapy for LOH syndrome. We herein report a simple and robust protocol for directed differentiation of human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) into Leydig-like cells by doxycycline-inducible overexpression of NR5A1 and treatment with a combination of 8-bromoadenosine-3′,5′-cyclic monophosphate (8-Br-cAMP) and forskolin. The differentiated cells expressed the steroidogenic enzyme genes STAR, CYP11A1, CYP17A1, and HSD3B2 and the specific markers of adult Leydig cells HSD17B3, INSL3, and LHCGR. Furthermore, we confirmed the secretion of functional testosterone from the cells into the culture supernatant by a testosterone-sensitive cell proliferation assay. These findings showed that the hiPSCs were able to be differentiated into Leydig-like cells, supporting the expectation that hiPSC-derived Leydig-like cells can be novel tools for treating LOH syndrome.研究論文（学術雑誌） - Elsevier BV, 2021年10月, iScience, 24(10) (10), 103140 - 103140研究論文（学術雑誌）
- BACKGROUND: Cancer stem cells (CSCs) are considered to be responsible for tumor initiation, formation, and poor prognosis of cancer patients. However, the rarity of CSCs in clinical samples makes it difficult to elucidate characteristics of CSCs, especially in osteosarcoma (OS). The aim of this study is to verify whether it is possible to generate CSC-like cells by transducing defined factors into an OS cell line. METHODS: We retrovirally transduced the Octamer-binding transcription factor 3/4 (OCT3/4), Kruppel-like factor 4 (KLF4), and SRY-box transcription factor 2 (SOX2) genes into the MG-63 human OS cell line (MG-OKS). Parental and GFP-transduced MG-63 cells were used as negative control. We assessed the properties of the generated cells in vitro and in vivo. Multiple comparisons among groups were made using a one-way analysis of variance (ANOVA) followed by post hoc testing with Tukey's procedure. RESULTS: MG-OKS cells in vitro exhibited the significantly increased mRNA expression levels of CSC markers (CD24, CD26, and CD133), decreased cell growth, increased chemoresistance and cell migration, and enhanced sphere formation. Notably, MG-OKS cells cultured under osteogenic differentiation conditions showed strongly positive staining for both Alizarin Red S and alkaline phosphatase, indicating osteogenesis of the cells. Gene ontology analysis of microarray data revealed significant upregulation of epidermal-related genes. Tumors derived from MG-OKS cells in vivo were significantly larger than those from other cells in μCT analysis, and immunohistochemical staining showed that Ki-67, osteocalcin, and HIF-1α-positive cells were more frequently detected in the MG-OKS-derived tumors. CONCLUSIONS: In this study, we successfully generated OS CSC-like cells with significantly enhanced CSC properties following transduction of defined factors.2020年10月, Stem cell research & therapy, 11(1) (1), 429 - 429, 英語, 国際誌, 国際共著していない研究論文（学術雑誌）
- In the original publication of the article, the following errors were noted and corrected in this correction.2020年10月, Journal of gastroenterology, 55(10) (10), 1010 - 1011, 英語, 国内誌
- BACKGROUND: The esophagus is known to be derived from the foregut. However, the mechanisms regulating this process remain unclear. In particular, the details of the human esophagus itself have been poorly researched. In this decade, studies using human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) have proven powerful tools for clarifying the developmental biology of various human organs. Several studies using hiPSCs have demonstrated that retinoic acid (RA) signaling promotes the differentiation of foregut into tissues such as lung and pancreas. However, the effect of RA signaling on the differentiation of foregut into esophagus remains unclear. METHODS: We established a novel stepwise protocol with transwell culture and an air-liquid interface system for esophageal epithelial cell (EEC) differentiation from hiPSCs. We then evaluated the effect of all-trans retinoic acid (ATRA), which is a retinoic acid receptor (RAR)α, RARβ and RARγ agonist, on the differentiation from the hiPSC-derived foregut. Finally, to identify which RAR subtype was involved in the differentiation, we used synthetic agonists and antagonists of RARα and RARγ, which are known to be expressed in esophagus. RESULTS: We successfully generated stratified layers of cells expressing EEC marker genes that were positive for lugol staining. The enhancing effect of ATRA on EEC differentiation was clearly demonstrated with quantitative reverse transcription polymerase chain reaction, immunohistology, lugol-staining and RNA sequencing analyses. RARγ agonist and antagonist enhanced and suppressed EEC differentiation, respectively. RARα agonist had no effect on the differentiation. CONCLUSION: We revealed that RARγ activation promotes the differentiation of hiPSCs-derived foregut into EECs.2020年06月, Journal of gastroenterology, 55(8) (8), 763 - 774, 英語, 国内誌, 国際共著していない[査読有り]研究論文（学術雑誌）
- Induced pluripotent stem cell (iPSC) technology offers a novel approach for conversion of human primary fibroblasts into melanocytes. During attempts to explore various protocols for differentiation of iPSCs into melanocytes, we found a distinct and self-renewing cell lineage that could differentiate into melanocytes, named as melanocyte precursor cells (MPCs). The MPCs exhibited a morphology distinctive from that of melanocytes, in lacking either the melanosomal structure or the melanocyte-specific marker genes MITF, TYR, and SOX10. In addition, gene expression studies in the MPCs showed high-level expression of WNT5A, ROR2, which are non-canonical WNT pathway markers, and its related receptor TGFβR2. In contrast, MPC differentiation into melanocytes was achieved by activating the canonical WNT pathway using the GSK3β inhibitor. Our data demonstrated the distinct characteristic of MPCs' ability to differentiate into melanocytes, and the underlying mechanism of interfacing between canonical WNT signaling pathway and non-canonical WNT signaling pathway.2019年09月, Pigment cell & melanoma research, 32(5) (5), 623 - 633, 英語, 国際誌, 国際共著していない[査読有り]研究論文（学術雑誌）
- For augmentation or reconstruction of urinary bladder after cystectomy, bladder urothelium derived from human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) has recently received focus. However, previous studies have only shown the emergence of cells expressing some urothelial markers among derivatives of hiPSCs, and no report has demonstrated the stratified structure, which is a particularly important attribute of the barrier function of mature bladder urothelium. In present study, we developed a method for the directed differentiation of hiPSCs into mature stratified bladder urothelium. The caudal hindgut, from which the bladder urothelium develops, was predominantly induced via the high-dose administration of CHIR99021 during definitive endoderm induction, and this treatment subsequently increased the expressions of uroplakins. Terminal differentiation, characterized by the increased expression of uroplakins, CK13, and CK20, was induced with the combination of Troglitazone + PD153035. FGF10 enhanced the expression of uroplakins and the stratification of the epithelium, and the transwell culture system further enhanced such stratification. Furthermore, the barrier function of our urothelium was demonstrated by a permeability assay using FITC-dextran. According to an immunohistological analysis, the stratified uroplakin II-positive epithelium was observed in the transwells. This method might be useful in the field of regenerative medicine of the bladder.2019年07月, Scientific reports, 9(1) (1), 10506 - 10506, 英語, 国際誌, 国際共著していない[査読有り]研究論文（学術雑誌）
- 2019年04月, Journal of Urology, 英語[査読有り]研究論文（学術雑誌）
- Springer Science and Business Media {LLC}, 2019年03月, European Urology Supplements, 18(1) (1), e1763, 英語[査読有り]研究論文（学術雑誌）
- John Wiley and Sons Ltd., 2018年01月, Stem cells translational medicine, 7(1) (1), 34 - 44, 英語, 国際共著していない[査読有り]研究論文（学術雑誌）
- 2017年10月, MOLECULAR CANCER RESEARCH, 15(10) (10), 1455 - 1466, 英語, 国際共著していない[査読有り]研究論文（学術雑誌）
- 2017年09月, SCIENTIFIC REPORTS, 7(1) (1), 12317, 英語, 国際共著していない[査読有り]研究論文（学術雑誌）
- 2016年09月, CELL STEM CELL, 19(3) (3), 341 - 354, 英語, 国際共著していない[査読有り]研究論文（学術雑誌）
- 2013年12月, Molecular Cell, 52(6) (6), 805 - 818, 英語, 国際共著している[査読有り]研究論文（学術雑誌）
- 2013年12月, PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA, 110(51) (51), 20569 - 20574, 英語, 国際共著していない[査読有り]研究論文（学術雑誌）
- 2009年08月, NATURE BIOTECHNOLOGY, 27(8) (8), 743 - 745, 英語[査読有り]研究論文（学術雑誌）
- 2008年01月, NATURE BIOTECHNOLOGY, 26(1) (1), 101 - 106, 英語[査読有り]研究論文（学術雑誌）
- 2005年04月, JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY, 280(13) (13), 12430 - 12437, 英語[査読有り]研究論文（学術雑誌）
- 2002年05月, INTERNATIONAL JOURNAL OF MOLECULAR MEDICINE, 9(5) (5), 489 - 493, 英語RelA suppresses the Wnt/beta-catenin pathway without exerting trans-acting transcriptional ability[査読有り]研究論文（学術雑誌）
- (一社)日本内分泌学会, 2019年04月, 日本内分泌学会雑誌, 95(1) (1), 408 - 408, 日本語下垂体発生における視床下部-口腔外胚葉間FGFの役割
- (一社)日本内分泌学会, 2019年04月, 日本内分泌学会雑誌, 95(1) (1), 352 - 352, 日本語下垂体発生における視床下部-口腔外胚葉間FGFの役割
- (公社)日本生化学会, 2008年11月, 日本生化学会大会・日本分子生物学会年会合同大会講演要旨集, 81回・31回, 1T25 - 10, 英語誘導性多能性幹細胞の神経分化と治療的効果(Neural differentiation and therapeutic effects of induced pluripotent stem cell)
- 医学のあゆみ 第273巻12号, 2020年06月ヒト内在性レトロウイルスと疾患
- 日本臨床73巻増刊号5, p74-79, 2015年ヒト多能性幹細胞株の分化特性とばらつき
- ファルマシア vol.48, No.9, p872-874, 2012年多能性幹細胞の標準化に向けて
- 生体の科学vol.61, No.4, p332-337, 2010年多能性幹細胞とmicroRNA
- 遺伝子医学MOOK 最新RNAと疾患研究 p186-191, 2009年多能性幹細胞とmicroRNA
- 臨床検査 53巻, 1号, p123-128, 2009年iPS細胞の樹立と今後の展望
- BIO INDUSTRY 4号, p89-95, 2008年がん遺伝子Mycを用いない人工多能性幹細胞の作成
- 遺伝子医学MOOK 進み続ける細胞移植治療の実際（上巻）p124-127, 2008年マウス線維芽細胞培養から誘導される多能性幹細胞
- 第23回日本再生医療学会総会, 2024年03月多能性幹細胞を⽤いた消化器領域の発生・病態研究
- 第46回日本分子生物学会年会, 2023年12月大腸がんで発現するHERV由来タンパク質の局在と機能の解析
- The 22nd Congress of the Federation of Asia and Oceania Perinatal Societies, 2023年10月Establishment of PHOX2B-GFP reporter iPS cell lines derived from healthy individuals and congenital central hypoventilation syndrome patients
- 第9回日本筋学会学術集会, 2023年08月福山型筋ジストロフィーに対する糖鎖増強療法
- 第22回日本再生医療学会総会, 2023年03月患者由来 iPS 細胞を用いた先天性中枢性低換気症候群の病態メカニズムの解析
- ISSCR 2022 Annual Meeting (San Francisco), 2022年06月GENERATION OF HUMAN IPS CELL-DERIVED LEYDIG CELLS AND ENCAPSULATION IN IMPLANTABLE DEVICES
- 第121回日本皮膚科学会総会, 2022年06月iPS細胞を用い細胞老化に着目した色素性乾皮症の病態解明
- 第21回日本再生医療学会総会, 2022年03月先天性中枢性低換気症候群患者由来iPS細胞の樹立と神経細胞への分化誘導
- 第109回 日本泌尿器科学会総会, 2021年12月, 日本語ヒトiPS細胞由来Leydig細胞の作製
- 第46回日本研究皮膚科学会学術大会, 英語Epigenetic regulation in melanocytes differentiated from induced pruripotent stem cells originated from xeroderma pigmentosum
- 第66回 日本生殖医学会学術講演会・総会, 2021年11月, 日本語ヒトiPS細胞由来Leydig細胞の作製法の改良と，分化過程の解明
- 第63回日本消化器病学会大会, 日本語患者由来大腸癌オルガノイドを用いたバルプロ酸の新規治療薬としての有用性の検討
- 第73回 西日本泌尿器科学会総会, 2021年11月, 英語Generation of human iPS cell-derived Leydig cells
- ISSCR/JSRM 2021 Tokyo International Symposium, 2021年10月, 英語Generation of human iPS cell-derived Leydig cells
- ISSCR/JSRM 2021 Tokyo International Symposium, 2021年10月, 英語The epithelial-derived factors and mechanical environment induce the muscularis mucosa of the iPSC-derived human gastric organoid
- ISSCR/JSRM 2021 Tokyo International Symposium, 英語Restoration of the defect in radial glial fiver cell migration and cortical plare organization in brain organoid model of Fukyama mascular dystrophy
- ISSCR/JSRM 2021 Tokyo International Symposium, 英語Usefulness of Melanocytes Differentiated from Induced Pluripotent Stem Cells for Research on Pathology of Xeroderma Pigmentosum
- ISSCR/JSRM 2021 Tokyo International Symposium, 英語Re-generation of cytotoxic γδT cells from human γδT-derived iPSCs
- ISSCR/JSRM 2021 Tokyo International Symposium, 英語Valproic acid suppresses the tissue-reconstructing ability of colorectal cancer stem cells by inhibition of GSK3
- 第30回日本色素細胞学会学術大会, 2021年10月, 日本語色素性乾皮症A群由来iPS細胞より分化したメラノサイトを用いた網羅的遺伝子発現解析
- 第36回日本整形外科学会基礎学術集会, 日本語Ewing肉腫におけるslow-cycling cellsの同定
- 第71回 日本泌尿器科学会中部総会, 2021年10月, 日本語ヒトiPS細胞由来Leydig細胞の作製法の改良と，分化過程の解明
- The 50th European Society for Dermatological Research Annual Meeting, 英語Comprehensive analyses on melanocytes differentiated from induced pruripotent stem cells originated from xeroderma pigmentosum complementation group A
- 第54回日本整形外科学会骨・軟部腫瘍学術集会, 日本語Ewing肉腫におけるslow cycling cellsの同定
- 第110回日本病理学会総会, 日本語上皮由来SHH、TGFβシグナル及び基質の硬度がhiPSC由来胃オルガノイドの粘膜筋板を誘導する
- 第18回 泌尿器科再建再生研究会, 2021年06月, 日本語ヒトiPS細胞由来Leydig細胞の作製
- 第20回日本再生医療学会総会, 日本語上皮由来SHH、TGFβシグナル及び気質の硬度がhiPSC由来胃オルガノイドの粘膜筋板を誘導する
- 第20回日本再生医療学会総会, 日本語γδT由来iPS細胞から再誘導したγδT細胞の腫瘍傷害性
- 第58回日本肺癌学会学術集会, 2017年10月, 日本語, 日本肺癌学会, 横浜, 国内会議人工肺癌幹細胞を用いた、肺癌組織再構築と新規治療法開発の試み口頭発表（一般）
- 東海大学医学部セミナー, 2017年09月, 日本語, 東海大学, 小田原, 国内会議人工大腸がん幹細胞を用いたがん幹細胞の特性解析とがん治療への応用公開講演，セミナー，チュートリアル，講習，講義等
- 第27回日本サイトメトリー学会学術集会, 2017年06月, 日本語, 日本サイトメトリー学会, 神戸, 国内会議人工癌幹細胞と癌オルガノイドを用いた癌幹細胞研究[招待有り]シンポジウム・ワークショップパネル（指名）
- 第34回日本呼吸器外科学会総会, 2017年05月, 日本語, 日本呼吸器外科学会, 福岡, 国内会議人工肺癌幹細胞による、肺癌組織再構築の試み口頭発表（一般）
- American Association for Cancer Research annual meeting 2017, 2017年04月, 英語, American Association for Cancer Research, Washington D.C., USA, 国際会議Interleukin-6 blockade, a novel cancer stem cell targeted therapy, attenuates lung cancer tissue construction.ポスター発表
■ 共同研究・競争的資金等の研究課題
- 国立研究開発法人日本医療研究開発機構, Ｂ型肝炎創薬実用化等研究事業, 2025年04月 - 2028年03月, 研究分担者B型肝炎ウイルスの生活環と病原性の機序解明による革新的創薬基盤研究
- AMED難治性疾患実用化研究事業, 2024年04月 - 2027年03月福山型筋ジストロフィー及び類縁疾患に対する低分子化合物Mn007を用いた糖鎖増強療法の実用化にむけた研究
- 基盤研究C, 2024年04月 - 2027年03月ヒト内在性レトロウイルス様配列由来Gag類似タンパク質の大腸がんにおける 機能解析
- 基盤研究B, 2022年04月 - 2026年03月大腸癌に対する腫瘍免疫活性を増強するエピジェネティクス標的薬の探索と作用機構解明
- 基盤研究B, 2021年04月 - 2026年03月FCMDのαジストログリカン糖鎖のホメオスタシスに着目した治療法開発
- AMED肝炎等克服実用化研究事業, 2022年04月 - 2025年03月レポーターHBVを駆使したB型肝炎ウイルス増殖機構の解析と創薬 ターゲットの探索・同定に資する研究
- AMED疾患特異的iPS細胞の利活用促進・難病研究加速 プログラム, 2021年06月 - 2024年03月FCMD及び類縁疾患のiPSCs由来三次元培養法による疾患モデルを駆使した 病態評価と低分子治療法開発
- AMED疾患特異的iPS細胞の利活用促進・難病研究加速 プログラム, 2021年06月 - 2024年03月疾患特異的iPS細胞を用いた先天性中枢性低換気症候群における低CO2感受性の 分子機構
- 日本学術振興会, 科学研究費助成事業 基盤研究(C), 基盤研究(C), 神戸大学, 2019年04月 - 2022年03月大腸がんにおけるヒト内在性レトロウイルスの発現解析と機能解明
- 日本学術振興会, 科学研究費助成事業 基盤研究(B), 基盤研究(B), 神戸大学, 2018年04月 - 2022年03月癌幹細胞の分子機構に立脚した大腸癌の予後因子同定と新規治療法の非臨床POC取得本研究においては、癌幹細胞の分子機構に立脚した大腸癌の新規治療法の非臨床POC取得に取り組んだ。大腸癌患者由来オルガノイドの樹立、培養とそれを用いた定量的薬効評価の系、さらにそのオルガノイドの免疫不全マウスへの移植によるxenograft作製及びそのれに対する薬効評価の系を確立した。これらの系を用いて、申請者らが大腸癌細胞株を用いて行った先行研究において見出した新規治療薬候補の有効性を検討したところ、いずれの系でも有効であることが明らかになった。
- 国立研究開発法人日本医療研究開発機構, 日本医療研究開発機構研究費, 2018年04月 - 2021年03月, 研究分担者福山型筋ジストロフィーに対する低分子化合物スクリーニングを用いた分子標的治療法開発
- AMED幹細胞・再生医学イノベーション創出プログラム, 2016年11月 - 2019年03月アセンブラーとしての癌/非癌幹細胞の機能解明とその制御技術の開発
- 日本学術振興会, 科学研究費助成事業 基盤研究(C), 基盤研究(C), 神戸大学, 2014年04月 - 2017年03月癌の発生および進展のプロセスにおいて、腫瘍免疫監視からの逸脱は重要な意義があると考えられるが、その分子機構の多くは不明である。本研究は、ヒトiPS細胞からの肝細胞への分化誘導技術等を駆使することにより、ヒト非癌肝細胞へのウイルス感染によって惹起される免疫標的分子の発現制御機構を包括的に明らかにし、それをターゲットとする創薬へと展開するための系を確立することを目的として行った。 ヒトiPS細胞由来肝細胞に、薬剤誘導性発現プラスミドを用いてC型肝炎ウイルスがコードするタンパク質の其々を強制発現する系を確立した。この系を用い、免疫標的分子の発現制御機構を解析することができた。競争的資金
- 学術研究助成基金助成金／若手研究(B), 2014年04月 - 2016年03月競争的資金
- 日本学術振興会, 科学研究費助成事業, 特別研究員奨励費, 京都大学, 2009年 - 2011年体細胞核の初期化に関わるmicroRNAの機能解析ヒト胚性幹(ES)細胞やヒトiPS細胞は様々な細胞へと分化することができる一方で、クローン間で分化傾向に違いがあることも報告されている。我々は様々な年齢、性別のドナーの様々な組織から、いろいろな方法で49個のiPS細胞を樹立した。また、これらのiPS細胞のmicroRNAの発現、遺伝子発現、DNAのメチル化を10株のES細胞と比較した。その結果、ES細胞とiPS細胞は分子レベルで非常に似通っており、両者を完全に区別できるようなマーカーは存在しなかった。次に、このような分子レベルでのばらつきと、神経細胞への分化傾向との関連を調べた。ES/iPS細胞をSFEBq法で分化させ、分化誘導開始後14日目に初期の神経分化マーカーPSA-NCAMと未分化細胞のマーカーOCT3/4の発現をフローサイトメトリーで調べた。ほとんどのクローンが、90%以上の割合でPSA-NCAM陽性の神経細胞へと分化したが、ごくまれに未分化細胞マーカーであるOCT3/4が10%程度残っているクローンが存在した。我々は後者のクローンを"bad"クローンと定義づけ、一方で、実験を繰り返しても未分化細胞の残存率が1%を超えない細胞を"good"クローンと定義した。分化誘導を行う前に、"bad"クローンと"good"クローンが予測できるかどうかを調べるために、我々は"bad"クローンと"good"クローンの未分化状態での遺伝子発現とmiRNA発現をマイクロアレイで比較した。その結果、いくつかの分子が"bad"クローンで高く発現している傾向にあることがわかった。これらの因子を組み合わせてマーカーとして用いることができれば、臨床応用に適さない、移植後に未分化腫瘍を形成する可能性のあるクローンを分化誘導前に除去することができると期待される。現在は、これらの因子の制御機構について解析し、報告する準備をしている。
- 日本学術振興会, 科学研究費助成事業 特別推進研究, 特別推進研究, 京都大学, 2007年 - 2011年細胞核初期化の分子基盤4つの転写因子を体細胞に導入することで多分化能を持ったiPS細胞が樹立できる。c-Mycを含めた4因子を用いた場合にキメラマウスで腫瘍化が高頻度で認められ、レトロウイルス由来のc-Mycが原因の一つであることが分かった。樹立条件などを検討しMycを用いずにiPS細胞を作ることに成功したが、性質の点で不十分であった。c-Mycの代替因子の探索を行いL-Mycを同定した。L-Myc iPS細胞は腫瘍化リスクもほとんど認められず、性質の点でも十分であった。レトロウイルスを用いずにプラスミドを用いることでもiPS細胞の樹立に成功した。このことにより体細胞への初期化因子の挿入が起こらずより安全な作製方法の確立に成功した。神経細胞への分化誘導とそれらの移植実験により安全性を検討する方法の確立も行った。また、肝細胞、血液細胞、心筋細胞への分化誘導系も確立した。iPS細胞の性状解析をディープシークエンサーなどを用いて詳細に解析する技術の導入も完了し、網羅的な遺伝子発現、メチル化解析、スプライシング解析なども行った。
- 日本学術振興会, 科学研究費助成事業, 若手研究(B), 京都大学, 2007年 - 2008年体細胞の初期化に関わるmicroRNAの機能解析マウス、ヒトの線維芽細胞にOct3/4, Sox2, c-Myc,Klf4の4つの因子を導入することによって様々な細胞へと分化できる能力を持ったES細胞と同様の性質を持つ細胞(iPS細胞)ができる。この時、がん遺伝子Mycを導入しなくてもiPS細胞を作製できること、また、Mycを除くとMycを含む4因子で導入した場合と比較してiPS細胞の誘導効率は減少するが、その際に、特定のmicroRNAをレトロウイルスを使って共発現させることによって、iPS細胞の誘導効率が上昇することがわかった。
- 色素幹細胞の製造方法特願2015-242724, 2015年12月11日, 特表2017-104085, 2017年06月15日特許権
- 大腸がん幹細胞の維持増殖方法、及び大腸がんオルガノイドの誘導方法特願2017-110626, 2017年06月05日特許権
- 人工多能性幹細胞の選別方法特願2014-503890, 2012年07月25日, 特表523735A, 2014年09月18日, 特許6143265特許権
- 人工多能性幹細胞の選別方法特願2012-548681, 2011年01月17日, 特表2013-516982, 2013年05月16日, 特許5936131特許権
- 効率的な核初期化方法特願2008-335129, 2008年12月26日, 特開2010-158171, 2010年07月22日, 特許5626619特許権
- 効率的な核初期化法PCT/JP2008/059586, 2008年05月23日, WO2009/075119, 2009年06月18日, 特許5558097特許権