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上山 健彦
バイオシグナル総合研究センター
教授

研究者基本情報

■ 学位
  • 博士（医学）, 神戸大学
■ 研究ニュース
■ 研究キーワード
  • 1103
  • 6905
  • 6904
  • 5805
■ 研究分野
  • ライフサイエンス / 医化学
  • ライフサイエンス / 神経科学一般
  • ライフサイエンス / 薬理学
■ 委員歴
  • 2019年10月 - 2022年03月, 文部科学省 科学技術・学術政策研究所 科学技術予測センター, 専門調査員
  • 日本薬理学会, 評議員

研究活動情報

■ 受賞
  • 2005年08月 広島大学医学部医学科広仁会, 広島大学医学部医学科広仁会 「平成17年度 基礎医学研究賞」, 新規NADPH oxidase (Nox4) の活性化機構と神経膠腫浸潤における役割の解明
    上山 健彦
    日本国
    その他の賞

■ 論文
  • Shunkou Kurasawa, Akira Ganaha, Shinya Ayabe, Atsushi Yoshiki, Fumiya Kawama, Shota Kitayama, Keiji Tabuchi, Kouhei Yamashita, Takehiko Ueyama
    DFNA1 (deafness, nonsyndromic autosomal dominant 1), initially identified as nonsyndromic sensorineural hearing loss, has been associated with an additional symptom: macrothrombocytopenia. However, the timing of the onset of hearing loss (HL) and thrombocytopenia has not been investigated, leaving it unclear which occurs earlier. Here, we generated a knock-in (KI) DFNA1 mouse model, diaphanous-related formin 1 (DIA1)KIΔv3/KIΔv3, in which Aequorea coerulescens green fluorescent protein (AcGFP)-tagged human DIA1(p.R1213X) was knocked into the ATG site of Dia1. Additionally, the exon 7 of Dia1 was deleted using genome editing to knock out (KO) Dia1-v3, a specific variant of Dia1. AcGFP-DIA1(p.R1213X) expression and endogenous DIA1 KO were confirmed in cochleae and platelets. Hearing function in DIA1KIΔv3/KIΔv3, but not DIA1KIΔv3/+ mice, evaluated by auditory brainstem response, was significantly worse at low frequencies compared to wild-type (WT) mice starting at 3 months of age (3M), with progressive deterioration. Using confocal microscopy and scanning electron microscopy, various stereociliary deformities were identified in the cochleae of DIA1KIΔv3/KIΔv3 mice. Platelet counts in DIA1KIΔv3/KIΔv3, but not DIA1KIΔv3/+ mice, were significantly lower than those in WT mice at 12M, but not at 6M. Furthermore, in a cohort of eight patients with DFNA1 harboring the p.R1213X mutation, HL preceded thrombocytopenia in three individuals. Thus, in both mice and humans, though HL and thrombocytopenia are progressive, HL manifests earlier than thrombocytopenia. Unlike myosin heavy chain 9 (MYH9)-related diseases, thrombocytopenia cannot be a predictive marker for HL in DFNA1. Nevertheless, monitoring platelet counts could provide insights into the progression of the hearing impairments in patients with DFNA1.
    2025年01月, FASEB journal : official publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology, 39(2) (2), e70309, 英語, 国際誌
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • Naoko Adachi, Douglas T Hess, Takehiko Ueyama
    At least 10% of proteins constituting the human proteome are subject to S-acylation by a long-chain fatty acid, thioesterified to a Cys thiol side chain. Fatty S-acylation (prototypically, S-palmitoylation) operates across eukaryotic phylogeny and cell type. S-palmitoylation is carried out in mammalian cells by a family of 23-24 dedicated zDHHC palmitoyl transferase enzymes, and mutation of zDHHCs is associated with a number of human pathophysiologies. Activation of the zDHHCs by auto-S-palmitoylation, the transthioesterification of the active site Cys by fatty acyl-CoA, is the necessary first step in zDHHC-mediated protein S-palmitoylation. Most prior in vitro assessments of zDHHC activation have utilized purified zDHHCs, a time- and effort-intensive approach, which removes zDHHCs from their native membrane environment. We describe here a facile assay for zDHHC activation in native membranes. We overexpressed HA-tagged wild-type or mutant zDHHCs in cultured HEK293 cells and prepared a whole membrane fraction, which was incubated with fluorescent palmitoyl CoA (NBD-palmitoyl-CoA) followed by SDS-PAGE, fluorescence imaging and western blotting for HA. We show by mutational analysis that, as assayed, zDHHC auto-S-palmitoylation by NBD-palmitoyl-CoA is limited to the active site Cys. Application of the assay revealed differential effects on zDHHC activation of posttranslational zDHHC modification, and of zDHHC mutations associated with human disease, in particular cancer. Our assay provides a facile means of assessing zDHHC activation and thus of differentiating the effects of zDHHC mutation and post-translational modification on zDHHC activation versus secondary effects on zDHHC functionality resulting from altered zDHHC interaction with substrate palmitoyl-proteins.
    2025年01月, Journal of lipid research, 100743 - 100743, 英語, 国際誌
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）
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  • Takashi Sasayama, Takeshi Hamada, Kazuhiro Tanaka, Hiroaki Nagashima, Shunsuke Yamanishi, Takehiko Ueyama
    Abstract Glioblastoma is the most common malignant brain tumor in adults, the survival rate of which has not significantly improved over the past three decades. Therefore, there is an urgent need to develop novel treatment modalities. We previously reported that G1 to S phase transition 1 (GSPT1) depletion induces delayed cell cycle in primary astrocytes. Herein, we examined the potential of GSPT1 as a novel target for glioblastoma therapy. CC-885, a cereblon modulator that degrades GSPT1 by bridging GSPT1 to the CRL4 E3 ubiquitin ligase complex, was administered to nude mice with transplanted brain tumors of U87 glioblastoma cells. The survival period was significantly longer in CC-885 treated mice than in control mice. Furthermore, we generated GSPT1-knockout (KO) U87 cells and GSPT1-KO U87 cells with stable overexpression of FLAG-tagged GSPT1 (Rescued GSPT1-KO). Mice with transplanted GSPT1-KO U87 cells and Rescued GSPT1-KO U87 cells showed significantly longer and similar survival periods, respectively, as those with wild-type (WT) U87 cells. GSPT1-KO U87 cells showed enhanced apoptosis, detected by cleaved PARP1, compared to WT U87 cells. Brain tumors with transplantation of GSPT1-KO U87 cells also showed enhanced apoptosis compared to those with transplantation of WT and Rescued GSPT1-KO U87 cells. GSPT1 expression was confirmed in patients with glioblastoma. However, the clinical study using 87 glioblastoma samples showed that GSPT1 mRNA levels were not associated with overall survival. Taken together, we propose that GSPT1 is an essential protein for glioblastoma growth, but not its malignant characteristics, and that GSPT1 is a potential target for developing glioblastoma therapeutics.
    Springer Science and Business Media LLC, 2024年08月, Cell Death & Disease, 15(8) (8)
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）
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  • Takeshi Kaizuka, Takehiro Suzuki, Noriyuki Kishi, Kota Tamada, Manfred W. Kilimann, Takehiko Ueyama, Masahiko Watanabe, Tomomi Shimogori, Hideyuki Okano, Naoshi Dohmae, Toru Takumi
    Abstract Postsynaptic proteins play crucial roles in synaptic function and plasticity. During brain development, alterations in synaptic number, shape, and stability occur, known as synapse maturation. However, the postsynaptic protein composition changes during development are not fully understood. Here, we show the trajectory of the postsynaptic proteome in developing male mice and common marmosets. Proteomic analysis of mice at 2, 3, 6, and 12 weeks of age shows that proteins involved in synaptogenesis are differentially expressed during this period. Analysis of published transcriptome datasets shows that the changes in postsynaptic protein composition in the mouse brain after 2 weeks of age correlate with gene expression changes. Proteomic analysis of marmosets at 0, 2, 3, 6, and 24 months of age show that the changes in the marmoset brain can be categorized into two parts: the first 2 months and after that. The changes observed in the first 2 months are similar to those in the mouse brain between 2 and 12 weeks of age. The changes observed in marmoset after 2 months old include differential expression of synaptogenesis-related molecules, which hardly overlap with that in mice. Our results provide a comprehensive proteomic resource that underlies developmental synapse maturation in rodents and primates.
    Springer Science and Business Media LLC, 2024年03月, Nature Communications, 15(1) (1)
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）
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  • Shunkou Kurasawa, Hiroaki Mohri, Keiji Tabuchi, Takehiko Ueyama
    Considerable evidence of reactive oxygen species (ROS) involvement in cochlear hair cell (HC) loss, leading to acquired sensorineural hearing loss (SNHL), were reported. Cochlear synaptopathy between HCs and spiral ganglion neurons has been gathering attention as a cochlear HC loss precursor not detectable by normal auditory evaluation. However, the molecular mechanisms linking ROS with HC loss, as well as the relationship between ROS and cochlear synaptopathy have not been elucidated. Here, we examined these linkages using NOX4-TG mice, which constitutively produce ROS without stimulation. mRNA levels of Piccolo 1, a major component of the synaptic ribbon (a specialized structure surrounded by synaptic vesicles in HCs), were decreased in postnatal day 6 NOX4-TG mice cochleae compared to those in WT mice; they were also decreased by noise exposure in 2-week-old WT cochleae. As noise exposure induces ROS production, this suggests that the synaptic ribbon is a target of ROS. The level of CtBP2, another synaptic ribbon component, was significantly lower in NOX4-TG cochleae of 1-month-old and 4-month-old mice compared to that in WT mice, although no significant differences were noted at 1.5- and 2-months. The decrease in CtBP2 plateaued in 4-month-old NOX4-TG, while it gradually decreased from 1 to 6 months in WT mice. Furthermore, CtBP2 level in 2-month-old NOX4-TG mice decreased significantly after exposure to cisplatin and noise compared to that in WT mice. These findings suggest that ROS lead to developmental delays and early degeneration of synaptic ribbons, which could be potential targets for novel therapeutics for ROS-induced SNHL.
    2023年10月, Neurobiology of disease, 186, 106280 - 106280, 英語, 国際誌
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）
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  • Takashi Nakamura, Hirofumi Sakaguchi, Hiroaki Mohri, Yuzuru Ninoyu, Akihiro Goto, Taro Yamaguchi, Yoshitaka Hishikawa, Michiyuki Matsuda, Naoaki Saito, Takehiko Ueyama
    Abstract Rac small GTPases play important roles during embryonic development of the inner ear; however, little is known regarding their function in cochlear hair cells (HCs) after specification. Here, we revealed the localization and activation of Racs in cochlear HCs using GFP-tagged Rac plasmids and transgenic mice expressing a Rac1-fluorescence resonance energy transfer (FRET) biosensor. Furthermore, we employed Rac1-knockout (Rac1-KO, Atoh1-Cre;Rac1flox/flox) and Rac1 and Rac3 double KO (Rac1/Rac3-DKO, Atoh1-Cre;Rac1flox/flox;Rac3−/−) mice, under the control of the Atoh1 promoter. However, both Rac1-KO and Rac1/Rac3-DKO mice exhibited normal cochlear HC morphology at 13 weeks of age and normal hearing function at 24 weeks of age. No hearing vulnerability was observed in young adult (6-week-old) Rac1/Rac3-DKO mice even after intense noise exposure. Consistent with prior reports, the results from Atoh1-Cre;tdTomato mice confirmed that the Atoh1 promoter became functional only after embryonic day 14 when the sensory HC precursors exit the cell cycle. Taken together, these findings indicate that although Rac1 and Rac3 contribute to the early development of sensory epithelia in cochleae, as previously shown, they are dispensable for the maturation of cochlear HCs in the postmitotic state or for hearing maintenance following HC maturation. Key messages Mice with Rac1 and Rac3 deletion were generated after HC specification. Knockout mice exhibit normal cochlear hair cell morphology and hearing. Racs are dispensable for hair cells in the postmitotic state after specification. Racs are dispensable for hearing maintenance after HC maturation.
    Springer Science and Business Media LLC, 2023年05月, Journal of Molecular Medicine, 101, 843 - 854
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）
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  • Yoko Niki, Naoko Adachi, Masaki Fukata, Yuko Fukata, Shinichiro Oku, Chieko Makino-Okamura, Seiji Takeuchi, Kazumasa Wakamatsu, Shosuke Ito, Lieve Declercq, Daniel B Yarosh, Tomas Mammone, Chikako Nishigori, Naoaki Saito, Takehiko Ueyama
    Palmitoylation is a lipid modification involving the attachment of palmitic acid to a cysteine residue, thereby affecting protein function. We investigated the effect of palmitoylation of tyrosinase, the rate-limiting enzyme in melanin synthesis, using a human three-dimensional skin model system and melanocyte culture. The palmitoylation inhibitor, 2-bromopalmitate, increased melanin content and tyrosinase protein levels in melanogenic cells by suppressing tyrosinase degradation. The palmitoylation site was Cysteine500 in the C-terminal cytoplasmic tail of tyrosinase. The nonpalmitoylatable mutant, tyrosinase (C500A), was slowly degraded and less ubiquitinated than wild-type tyrosinase. Screening for the Asp-His-His-Cys (DHHC) family of proteins for tyrosinase palmitoylation suggested that DHHC2, 3, 7, and 15 are involved in tyrosinase palmitoylation. Knockdown of DHHC2, 3, or 15 increased tyrosinase protein levels and melanin content. Determination of their subcellular localization in primary melanocytes revealed that DHHC2, 3, and 15 were localized in the endoplasmic reticulum, Golgi apparatus, and/or melanosomes, whereas only DHHC2 was localized in the melanosomes. Immunoprecipitation showed that DHHC2 and DHHC3 predominantly bind to mature and immature tyrosinase, respectively. Taken together, tyrosinase palmitoylation at Cysteine500 by DHHC2, 3, and/or 15, especially DHHC2 in trans-Golgi apparatus and melanosomes and DHHC3 in the endoplasmic reticulum and cis-Golgi apparatus, regulate melanogenesis by modulating tyrosinase protein levels.
    2022年09月, The Journal of investigative dermatology, 143(2) (2), 317 - 327, 英語, 国際誌
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）
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  • Bong Jik Kim, Takushi Miyoshi, Taimur Chaudhry, Thomas B Friedman, Byung Yoon Choi, Takehiko Ueyama
    Diaphanous-related formin 1 (DIAPH1) is a formin homology F-actin elongating protein encoded by DIAPH1. Homozygous recessive variants resulting in the loss of DIAPH1 function cause seizures, cortical blindness, and microcephaly syndrome (SCBMS), but hearing loss has not been reported. In contrast, dominant variants of human DIAPH1 are associated with DFNA1 non-syndromic sensorineural hearing loss. The deafness phenotype is due partly to abnormal F-actin elongation activity caused by disruption of the DIAPH1 autoinhibitory mechanism. We report an elderly female heterozygous for the c.3145C>T: p.R1049X variant who showed late-onset sensorineural hearing loss in her fifth decade. p.R1049X lacks F-actin elongation activity because this variant truncates one-third of the FH2 domain, which is vital for DIAPH1 dimerization and processive F-actin elongation activity. Concordantly, no increase of F-actin or processive F-actin elongation activity was observed after overexpression of p.R1049X DIAPH1 in HeLa cells or by single-molecule microscopy using Xenopus XTC cells. However, overexpression of the p.R1049X variant impairs formation of cell-cell junctions and mitosis. We speculate that late-onset hearing loss is a long-term consequence of heterozygosity for the recessive p.R1049X variant, a phenotype that may have been overlooked among carriers of other recessive alleles of DIAPH1.
    2022年04月, Clinical genetics, 101(4) (4), 466 - 471, 英語, 国際誌
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）
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  • Hiroaki Mohri, Yuzuru Ninoyu, Hirofumi Sakaguchi, Shigeru Hirano, Naoaki Saito, Takehiko Ueyama
    Reactive oxygen species (ROS) produced by NADPH oxidases (Nox) contribute to the development of different types of sensorineural hearing loss (SNHL), a common impairment in humans with no established treatment. Although the essential role of Nox3 in otoconia biosynthesis and its possible involvement in hearing have been reported in rodents, immunohistological methods targeted at detecting Nox3 expression in inner ear cells reveal ambiguous results. Therefore, the mechanism underlying Nox3-dependent SNHL remains unclear and warrants further investigation. We generated Nox3-Cre knock-in mice, in which Nox3 was replaced with Cre recombinase (Cre). Using Nox3-Cre;tdTomato mice of either sex, in which tdTomato is expressed under the control of the Nox3 promoter, we determined Nox3-expressing regions and cell types in the inner ear. Nox3-expressing cells in the cochlea included various types of supporting cells, outer hair cells, inner hair cells, and spiral ganglion neurons. Nox3 expression increased with cisplatin, age, and noise insults. Moreover, increased Nox3 expression in supporting cells and outer hair cells, especially at the basal turn of the cochlea, played essential roles in ROS-related SNHL. The extent of Nox3 involvement in SNHL follows the following order: cisplatin-induced hearing loss > age-related hearing loss > noise-induced hearing loss. Here, on the basis of Nox3-Cre;tdTomato, which can be used as a reporter system (Nox3-Cre +/- ;tdTomato +/+ and Nox3-Cre +/+ ;tdTomato +/+), and Nox3-KO (Nox3-Cre +/+ ;tdTomato +/+) mice, we demonstrate that Nox3 inhibition in the cochlea is a promising strategy for ROS-related SNHL, such as cisplatin-induced HL, age-related HL, and noise-induced HL.SIGNIFICANCE STATEMENT We found Nox3-expressing regions and cell types in the inner ear, especially in the cochlea, using Nox3-Cre;tdTomato mice, a reporter system generated in this study. Nox3 expression increased with cisplatin, age, and noise insults in specific cell types in the cochlea and resulted in the loss (apoptosis) of outer hair cells. Thus, Nox3 might serve as a molecular target for the development of therapeutics for sensorineural hearing loss, particularly cisplatin-induced, age-related, and noise-induced hearing loss.
    2021年05月, The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience, 41(21) (21), 4716 - 4731, 英語, 国際誌
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）
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  • Yuzuru Ninoyu, Hirofumi Sakaguchi, Chen Lin, Toshiaki Suzuki, Shigeru Hirano, Yasuo Hisa, Naoaki Saito, Takehiko Ueyama
    Dia1, which belongs to the diaphanous-related formin family, influences a variety of cellular processes through straight actin elongation activity. Recently, novel DIA1 mutants such as p.R1213X (p.R1204X) and p.A265S, have been reported to cause an autosomal dominant sensorineural hearing loss (DFNA1). Additionally, active DIA1 mutants induce progressive hearing loss in a gain-of-function manner. However, the subcellular localization and pathological function of DIA1(R1213X/R1204X) remains unknown. In the present study, we demonstrated the localization of endogenous Dia1 and the constitutively active DIA1 mutant in the cochlea, using transgenic mice expressing FLAG-tagged DIA1(R1204X) (DIA1-TG). Endogenous Dia1 and the DIA1 mutant were regionally expressed at the organ of Corti and the spiral ganglion from early life; alongside cochlear maturation, they became localized at the apical junctional complexes (AJCs) between hair cells (HCs) and supporting cells (SCs). To investigate HC vulnerability in the DIA1-TG mice, we exposed 4-week-old mice to moderate noise, which induced temporary threshold shifts with cochlear synaptopathy and ultrastructural changes in stereocilia 4 weeks post noise exposure. Furthermore, we established a knock-in (KI) mouse line expressing AcGFP-tagged DIA1(R1213X) (DIA1-KI) and confirmed mutant localization at AJCs and the tips of stereocilia in HCs. In MDCKAcGFP-DIA1(R1213X) cells with stable expression of AcGFP-DIA1(R1213X), AcGFP-DIA1(R1213X) revealed marked localization at microvilli on the apical surface of cells and decreased localization at cell-cell junctions. The DIA1-TG mice demonstrated hazy and ruffled circumferential actin belts at AJCs and abnormal stereocilia accompanied with HC loss at 5 months of age. In conclusion, Dia1 plays a pivotal role in the development and maintenance of AJCs and stereocilia, ensuring cochlear and HC integrity. Subclinical/latent vulnerability of HCs may be the cause of progressive hearing loss in DFNA1 patients, thus suggesting new therapeutic targets for preventing HC degeneration and progressive hearing loss associated with DFNA1.
    2020年07月, Cell death & disease, 11(7) (7), 536 - 536, 英語, 国際誌
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）
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  • Shigefumi Morioka, Hirofumi Sakaguchi, Hiroaki Mohri, Mariko Taniguchi-Ikeda, Motoi Kanagawa, Toshiaki Suzuki, Yuko Miyagoe-Suzuki, Tatsushi Toda, Naoaki Saito, Takehiko Ueyama
    Public Library of Science (PLoS), 2020年05月, PLOS Genetics, 16(5) (5), e1008826 - e1008826, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）
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  • Takehiko Ueyama, Megumi Sakuma, Mio Nakatsuji, Tatsuya Uebi, Takeshi Hamada, Atsu Aiba, Naoaki Saito
    2020年01月, J Investigative Dermatology, 140, 75 - 84, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）
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  • Differential disruption of autoinhibition and defect in assembly of cytoskeleton during cell division decide the fates of human DIAPH1-related cytoskeletopathy
    Bong Jik Kim, Takehiko Ueyama, Takushi Miyoshi, Shin-ichiro Kitajiri, Byung Yoon Choi
    2019年12月, J Medical Genetics, 56(12) (12), 818 - 827, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • Shirafuji T, Shimazaki H, Miyagi T, Ueyama T, Adachi N, Tanaka S, Hide I, Saito N, Sakai N
    Spinocerebellar ataxia type 14 (SCA14) is an autosomal dominant neurodegenerative disorder characterized by cerebellar ataxia with myoclonus, dystonia, spasticity, and rigidity. Although missense mutations and a deletion mutation have been found in the protein kinase C gamma (PRKCG) gene encoding protein kinase C γ (PKCγ) in SCA14 families, a nonsense mutation has not been reported. The patho-mechanisms underlying SCA14 remain poorly understood. However, gain-of-function mechanisms and loss-of-function mechanisms, but not dominant negative mechanisms, were reported the patho-mechanism of SCA14. We identified the c.226C>T mutation of PRKCG, which caused the p.R76X in PKCγ by whole-exome sequencing in patients presenting cerebellar atrophy with cognitive and hearing impairment. To investigate the patho-mechanism of our case, we studied aggregation formation, cell death, and PKC inhibitory effect by confocal microscopy, western blotting with cleaved caspase 3, and pSer PKC motif antibodies, respectively. PKCγ(R76X)-GFP have aggregations the same as wild-type (WT) PKCγ-GFP. The PKCγ(R76X)-GFP inhibited PKC phosphorylation activity more than GFP alone. It also induced more apoptosis in COS7 and SH-SY5Y cells compared to WT-PKCγ-GFP and GFP. We first reported SCA14 patients with p.R76X in PKCγ who have cerebellar atrophy with cognitive and hearing impairment. Our results suggest that a dominant negative mechanism due to truncated peptides produced by p.R76X may be at least partially responsible for the cerebellar atrophy.
    2019年07月, Molecular and Cellular Neuroscience, 98, 46 - 53, 英語, 国際誌
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • Takehiko Ueyama
    The small GTPases of the Rho-family (Rho-family GTPases) have various physiological functions, including cytoskeletal regulation, cell polarity establishment, cell proliferation and motility, transcription, reactive oxygen species (ROS) production, and tumorigenesis. A relatively large number of downstream targets of Rho-family GTPases have been reported for in vitro studies. However, only a small number of signal pathways have been established at the in vivo level. Cumulative evidence for the functions of Rho-family GTPases has been reported for in vivo studies using genetically engineered mouse models. It was based on different cell- and tissue-specific conditional genes targeting mice. In this review, we introduce recent advances in in vivo studies, including human patient trials on Rho-family GTPases, focusing on highly polarized sensory organs, such as the cochlea, which is the primary hearing organ, host defenses involving reactive oxygen species (ROS) production, and tumorigenesis (especially associated with RAC, novel RAC1-GSPT1 signaling, RHOA, and RHOBTB2).
    2019年01月, Cells, 8(2) (2), 英語, 国際誌
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）
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  • Nakazono A, Adachi N, Takahashi H, Seki T, Hamada D, Ueyama T, Sakai N, Saito N
    2018年09月, J Biol Chem, 293(38) (38), 14758 - 14774, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）
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  • Morioka S, Sakaguchi H, Yamaguchi T, Ninoyu Y, Mohri H, Nakamura T, Hisa Y, Ogita K, Saito N, Ueyama T
    Previous studies have convincingly argued that reactive oxygen species (ROS) contribute to the development of several major types of sensorineural hearing loss, such as noise-induced hearing loss (NIHL), drug-induced hearing loss, and age-related hearing loss. However, the underlying molecular mechanisms induced by ROS in these pathologies remain unclear. To resolve this issue, we established an in vivo model of ROS overproduction by generating a transgenic (TG) mouse line expressing the human NADPH oxidase 4 (NOX4, NOX4-TG mice), which is a constitutively active ROS-producing enzyme that does not require stimulation or an activator. Overproduction of ROS was detected at the cochlea of the inner ear in NOX4-TG mice, but they showed normal hearing function under baseline conditions. However, they demonstrated hearing function vulnerability, especially at high-frequency sounds, upon exposure to intense noise, which was accompanied by loss of cochlear outer hair cells (OHCs). The vulnerability to loss of hearing function and OHCs was rescued by treatment with the antioxidant Tempol. Additionally, we found increased protein levels of the heat-shock protein 47 (HSP47) in models using HEK293 cells, including H2 O2 treatment and cells with stable and transient expression of NOX4. Furthermore, the up-regulated levels of Hsp47 were observed in both the cochlea and heart of NOX4-TG mice. Thus, antioxidant therapy is a promising approach for the treatment of NIHL. Hsp47 may be an endogenous antioxidant factor, compensating for the chronic ROS overexposure in vivo, and counteracting ROS-related hearing loss.
    2018年08月, J Neurochemistry, 146(4) (4), 459 - 473, 英語, 国際誌
    [査読有り]
    研究論文（国際会議プロシーディングス）
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  • Isao Sakamoto, Takehiko Ueyama, Masakazu Hayashibe, Takashi Nakamura, Hiroaki Mohri, Hiroshi Kiyonari, Michiko Shigyo, Chihiro Tohda, Naoaki Saito
    Academic Press Inc., 2018年04月, Experimental Neurology, 302, 57 - 67, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）
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  • ShirafujiT, Ueyama T, AdachiN, YoshinoK, SotomaruY, UwadaJ, KaneokaA, UedaT, TanakaS, HideI, SaitoN, SakaiN
    Society for Neuroscience, 2018年01月, J Neurosci, 38(2) (2), 278 - 290, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • Hanes CM, D''AmicoAE, Ueyama T, Wong AC, Zhang X, Hynes WF, Barroso MM, Cady NC, Trebak M, Saito N, Lennartz MR
    2017年07月, J Immunol, 199(1) (1), 271 - 277, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • Takashi Nakamura, Takehiko Ueyama, Yuzuru Ninoyu, Hirofumi Sakaguchi, Narantsog Choijookhuu, Yoshitaka Hishikawa, Hiroshi Kiyonari, Masaaki Kohta, Mizuho Sakahara, Ivan de Curtis, Eiji Kohmura, Yasuo Hisa, Atsu Aiba, Naoaki Saito
    Rac signaling impacts a relatively large number of downstream targets; however, few studies have established an association between Rac pathways and pathological conditions. In the present study, we generated mice with double knockout of Rac1 and Rac3 (Atoh1-Cre;Rac1flox/flox;Rac3-/- ) in cerebellar granule neurons (CGNs). We observed impaired tangential migration at E16.5, as well as numerous apoptotic CGNs at the deepest layer of the external granule layer (EGL) in the medial cerebellum of Atoh1-Cre;Rac1flox/flox;Rac3-/- mice at P8. Atoh1-Cre;Rac1flox/flox;Rac3-/- CGNs differentiated normally until expression of p27kip1 and NeuN in the deep EGL at P5. Primary CGNs and cerebellar microexplants from Atoh1-Cre;Rac1flox/flox;Rac3-/- mice exhibited impaired neuritogenesis, which was more apparent in Map2-positive dendrites. Such findings suggest that impaired tangential migration and final differentiation of CGNs have resulted in decreased cerebellum size and agenesis of the medial internal granule layer, respectively. Furthermore, Rac depleted/deleted cells exhibited decreased levels of Mid1 and impaired mTORC1 signaling. Mid1 depletion in CGNs produced mild impairments in neuritogenesis and reductions in mTORC1 signaling. Thus, a novel Rac-signaling pathway (Rac1-Mid1-mTORC1) may be involved in medial cerebellar development.
    2017年05月, Development (Cambridge, England), 144(10) (10), 1863 - 1875, 英語, 国際誌
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）
    神戸大学リポジトリ（Kernel）へのリンク

  • Taiji Ishii, Takehiko Ueyama, Michiko Shigyo, Masaaki Kohta, Takeshi Kondoh, Tomoharu Kuboyama, Tatsuya Uebi, Takeshi Hamada, David H Gutmann, Atsu Aiba, Eiji Kohmura, Chihiro Tohda, Naoaki Saito
    Astrogliosis (i.e. glial scar), which is comprised primarily of proliferated astrocytes at the lesion site and migrated astrocytes from neighboring regions, is one of the key reactions in determining outcomes after CNS injury. In an effort to identify potential molecules/pathways that regulate astrogliosis, we sought to determine whether Rac/Rac-mediated signaling in astrocytes represents a novel candidate for therapeutic intervention following CNS injury. For these studies, we generated mice with Rac1 deletion under the control of the GFAP (glial fibrillary acidic protein) promoter (GFAP-Cre;Rac1flox/flox). GFAP-Cre;Rac1flox/flox (Rac1-KO) mice exhibited better recovery after spinal cord injury and exhibited reduced astrogliosis at the lesion site relative to control. Reduced astrogliosis was also observed in Rac1-KO mice following microbeam irradiation-induced injury. Moreover, knockdown (KD) or KO of Rac1 in astrocytes (LN229 cells, primary astrocytes, or primary astrocytes from Rac1-KO mice) led to delayed cell cycle progression and reduced cell migration. Rac1-KD or Rac1-KO astrocytes additionally had decreased levels of GSPT1 (G1 to S phase transition 1) expression and reduced responses of IL-1β and GSPT1 to LPS treatment, indicating that IL-1β and GSPT1 are downstream molecules of Rac1 associated with inflammatory condition. Furthermore, GSPT1-KD astrocytes had cell cycle delay, with no effect on cell migration. The cell cycle delay induced by Rac1-KD was rescued by overexpression of GSPT1. Based on these results, we propose that Rac1-GSPT1 represents a novel signaling axis in astrocytes that accelerates proliferation in response to inflammation, which is one important factor in the development of astrogliosis/glial scar following CNS injury.
    2017年01月, The Journal of biological chemistry, 292(4) (4), 1240 - 1250, 英語, 国際誌
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • Hirofumi Sakaguchi, Takashi Nakamura, Takehiko Ueyama
    Japan Society for Equilibrium Research, 2017年, Equilibrium Research, 76(6) (6), 720 - 726, 日本語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • ShirafujiT, Ueyama T, TanakaS, HideI, SaitoN, SakaiN
    2017年, Acta Histochem Cytochem, 50(6) (6), 177 - 180, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • Takehiko Ueyama, Yuzuru Ninoyu, Shin-ya Nishio, Takushi Miyoshi, Hiroko Torii, Koji Nishimura, Kazuma Sugahara, Hideaki Sakata, Dean Thumkeo, Hirofumi Sakaguchi, Naoki Watanabe, Shin-ichi Usami, Naoaki Saito, Shin-ichiro Kitajiri
    2016年11月, EMBO MOLECULAR MEDICINE, 8(11) (11), 1310 - 1324, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）
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  • Takehiko Ueyama, Megumi Sakuma, Yuzuru Ninoyu, Takeshi Hamada, Corinne Dupuy, Miklós Geiszt, Thomas L. Leto, Naoaki Saito
    American Society for Biochemistry and Molecular Biology Inc., 2015年03月, Journal of Biological Chemistry, 290(10) (10), 6495 - 6506, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • Takahashi H, Adachi N, Shirafuji T, Danno S, Ueyama T, Vendruscolo M, Shuvaev AN, Sugimoto T, Seki T, Hamada D, Irie K, Hirai H, Sakai N, Saito N
    2015年01月, Hum Mol Genet, 24(2) (2), 525 - 539, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • RANTES/CCL5 mediated-biological effects depend on the syndecan-4/PKCα signaling pathway
    Maillard L, Saito N, Hlawaty H, Friand V, Suffee N, Chmilewsky F, Haddad O, Laguillier C, Guyot E, Ueyama T, Oudar O, Sutton A, Charnaux N
    2014年09月, Biol Open, 3(10) (10), 995 - 1004, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • Shirafuji T, Ueyama T, Yoshino K, Takahashi H, Adachi N, Ago Y, Koda K, Nashida T, Hiramatsu N, Matsuda T, Toda T, Sakai N, Saito N
    2014年07月, J Neurosci, 34(28) (28), 9268 - 9280, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）
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  • Takehiko Ueyama, Hirofumi Sakaguchi, Takashi Nakamura, Akihiro Goto, Shigefumi Morioka, Aya Shimizu, Kazuki Nakao, Yoshitaka Hishikawa, Yuzuru Ninoyu, Hidetoshi Kassai, Shiro Suetsugu, Takehiko Koji, Bernd Fritzsch, Shigenobu Yonemura, Yasuo Hisa, Michiyuki Matsuda, Atsu Aiba, Naoaki Saito
    2014年05月, JOURNAL OF CELL SCIENCE, 127(9) (9), 2040 - 2052, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • Hyun Choi, Ju-yearl Park, Hyoung-June Kim, Minsoo Noh, Takehiko Ueyama, Yunsoo Bae, Tae Ryong Lee, Dong Wook Shin
    2014年04月, JOURNAL OF DERMATOLOGICAL SCIENCE, 74(1) (1), 56 - 63, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • Sakuma M, Shirai Y, Ueyama T, Saito N
    2014年03月, Biochem Biophys Res Commun, 445(2) (2), 340 - 345, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • Takehiko Ueyama, Jeonghyun Son, Takeshi Kobayashi, Takeshi Hamada, Takashi Nakamura, Hirofumi Sakaguchi, Toshihiko Shirafuji, Naoaki Saito
    2013年09月, JOURNAL OF IMMUNOLOGY, 191(5) (5), 2560 - 2569, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • Daniel Schlam, Michal Bohdanowicz, Alexandros Chatilialoglu, Benjamin E. Steinberg, Takehiko Ueyama, Guangwei Du, Sergio Grinstein, Gregory D. Fairn
    2013年08月, Journal of Biological Chemistry, 288(32) (32), 23090 - 23104, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • Michal Bohdanowicz, Daniel Schlam, Martin Hermansson, David Rizzuti, Gregory D. Fairn, Takehiko Ueyama, Pentti Somerharju, Guangwei Du, Sergio Grinstein
    2013年06月, Molecular Biology of the Cell, 24(11) (11), 1700 - 1712, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • Yamashita K, Miyoshi T, Arai Y, Mizugishi K, Takaori-Kondo A, Ueyama T
    2013年04月, Int J Hematol, 97(4) (4), 505 - 510, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • Ueyama T, Nakakita J, Nakamura T, Kobayashi T, Kobayashi T, Son J, Sakuma M, Sakaguchi H, Leto TL, Saito N
    2011年11月, The Journal of biological chemistry, 286(47) (47), 40693 - 40705, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • Shirai Y, Morioka S, Sakuma M, Yoshino K, Otsuji C, Sakai N, Kashiwagi K, Chida K, Shirakawa R, Horiuchi H, Nishigori C, Ueyama T, Saito N
    2011年04月, Mol Biol Cell, 22(8) (8), 1340 - 1352, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • Takumi Kawasaki, Takehiko Ueyama, Ingo Lange, Stefan Feske, Naoaki Saito
    2010年08月, JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY, 285(33) (33), 25720 - 25730, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • Eisuke Adachi, Yutaka Kazoe, Yohei Sato, Yuko Suzuki, Tetsumei Urano, Takehiko Ueyama, Naoaki Saito, Viacheslav O. Nikolaev, Martin J. Lohse, Makoto Tominaga, Hideo Mogami
    2009年11月, PFLUGERS ARCHIV-EUROPEAN JOURNAL OF PHYSIOLOGY, 459(1) (1), 227 - 234, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • Thomas L. Leto, Stanislas Morand, Darrell Hurt, Takehiko Ueyama
    2009年10月, ANTIOXIDANTS & REDOX SIGNALING, 11(10) (10), 2607 - 2619, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • Stanislas Morand, Takehiko Ueyama, Satoshi Tsujibe, Naoaki Saito, Agnieszka Korzeniowska, Thomas L. Leto
    2009年04月, FASEB JOURNAL, 23(4) (4), 1205 - 1218, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • Noriaki Ashida, Takehiko Ueyama, Kyoko Rikitake, Yasuhito Shirai, Mika Eto, Takeshi Kondoh, Eiji Kohmura, Naoaki Saito
    2008年12月, NEUROSCIENCE LETTERS, 446(2-3) (2-3), 123 - 128, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • Sequential binding of cytosolic phox complex to phagosomes through regulated adaptor proteins: Evaluation using the novel monomeric kusabira-green system and live imaging of phagocytosis
    Takehiko Ueyama, Tomoko Kusakabe, Satoshi Karasawa, Takumi Kawasaki, Aya Shimizu, Jeonghyun Son, Thomas L. Leto, Atsushi Miyawaki, Naoaki Saito
    2008年07月, JOURNAL OF IMMUNOLOGY, 181(1) (1), 629 - 640, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • Naoko Adachi, Takeshi Kobayashi, Hideyuki Takahashi, Takumi Kawasaki, Yasuhito Shirai, Takehiko Ueyama, Toshio Matsuda, Takahiro Seki, Norio Sakai, Naoaki Saito
    2008年07月, JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY, 283(28) (28), 19854 - 19863, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • Takumi Kawasaki, Takeshi Kobayashi, Takehiko Ueyama, Yasuhito Shirai, Naoaki Saito
    2008年01月, BIOCHEMICAL JOURNAL, 409, 471 - 479, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • Takehiko Ueyama, Toshihiko Tatsuno, Takumi Kawasaki, Satoshi Tsujibe, Yasuhito Shirai, Hideki Sumimoto, Thomas L. Leto, Naoaki Saito
    2007年02月, MOLECULAR BIOLOGY OF THE CELL, 18(2) (2), 441 - 454, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）
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  • Takehiko Ueyama, Kristen Lekstrom, Satoshi Tsujibe, Naoaki Saito, Thomas L. Leto
    2007年01月, FREE RADICAL BIOLOGY AND MEDICINE, 42(2) (2), 180 - 190, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）
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  • T Matsubara, Y Shirai, K Miyasaka, T Murakami, Y Yamaguchi, T Ueyama, M Kai, F Sakane, H Kanoh, T Hashimoto, S Kamada, U Kikkawa, N Saito
    2006年03月, JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY, 281(10) (10), 6152 - 6164, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • T Ueyama, M Geiszt, TL Leto
    2006年03月, MOLECULAR AND CELLULAR BIOLOGY, 26(6) (6), 2160 - 2174, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）
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  • KL Cheeseman, T Ueyama, TM Michaud, K Kashiwagi, D Wang, LA Flax, Y Shirai, DJ Loegering, N Saito, MR Lennartz
    2006年02月, MOLECULAR BIOLOGY OF THE CELL, 17(2) (2), 799 - 813, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • Isoform-specific Membrane Targeting Mechanism of Rac During FcγR-mediated Phagocytosis.-- Positive charge-dependent and independent targeting mechanism of Rac to the phagosome.
    Ueyama Takehiko, Eto Mika, Kami Keiichiro, Tatsuno Toshihiko, Kobayashi Toshihiro, Shirai Yasuhito, Lennarzs R. Michelle, Takeya Ryu, Sumimoto Hideki, Saito Naoaki
    2005年08月, J. Immunol., 175(4) (4), 2381 - 2390, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • S Hayashi, T Ueyama, T Kajimoto, K Yagi, E Kohmura, N Saito
    2005年05月, JOURNAL OF NEUROCHEMISTRY, 93(4) (4), 883 - 891, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • Superoxide production at phagosomal cup/phagosome through beta I protein kinase C during Fc gamma R-mediated phagocytosis in microglia
    T Ueyama, MR Lennartz, Y Noda, T Kobayashi, Y Shirai, K Kikitake, T Yamasaki, S Hayashi, N Sakai, H Seguchi, M Sawada, H Sumimoto, N Saito
    2004年10月, JOURNAL OF IMMUNOLOGY, 173(7) (7), 4582 - 4589, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • A Kageyama, M Oka, T Okada, S Nakamura, T Ueyama, N Saito, VJ Hearing, M Ichihashi, C Nishigori
    2004年06月, JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY, 279(26) (26), 27774 - 27780, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • AK Bhattacharjee, T Ueyama, T Kondoh, S Hayashi, A Abouelfetouh, N Sakai, N Saito, E Kohmura
    2004年05月, BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS, 317(4) (4), 1144 - 1148, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • K Sakai, C Hasegawa, M Okura, O Morikawa, T Ueyama, Y Shirai, N Sakai, N Saito
    2003年05月, NEUROSCIENCE LETTERS, 342(3) (3), 175 - 178, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • Elaine C. Larsen, Takehiko Ueyama, Pamela M. Brannock, Yasuhito Shirai, Naoaki Saito, Christer Larsson, Daniel Loegering, Peter B. Weber, Michelle R. Lennartz
    2002年12月, Journal of Cell Biology, 159(6) (6), 939 - 944, 英語
    研究論文（学術雑誌）

  • Naoki Irie, Norio Sakai, Takehiko Ueyama, Taketoshi Kajimoto, Yasuhito Shirai, Naoaki Saito
    2002年, Biochemical and Biophysical Research Communications, 298(5) (5), 738 - 743, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • Generation of a constitutively active fragment of PKN in microglia/macrophages after middle cerebral artery occlusion in rats
    Ueyama T, Y Ren, N Sakai, M Takahashi, Y Ono, T Kondoh, N Tamaki, N Saito
    2001年11月, J Neurochem, 79(4) (4), 903 - 913, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • cDNA cloning of an alternative splicing variant of protein kinase C delta (PKC delta III), a new truncated form of PKC delta, in rats
    T Ueyama, Y Ren, S Ohmori, K Sakai, N Tamaki, N Saito
    2000年03月, BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS, 269(2) (2), 557 - 563, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • Non-traumatic acute paraplegia associated with cervical disk herniation: A case report
    Ueyama T
    1999年01月, Surgical Neurology, 52, 204 - 207, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • Bridging veins on the tentorial surface of the cerebellum: A microsurgical anatomic study and operative considerations
    Ueyama T, Al-Mefty O, Tamaki N
    1998年11月, Neurosurgery, 43(5) (5), 1137 - 1145
    [査読有り]

  • UEYAMA T, TAMAKI N, KONDOH T, KURATA H
    1998年01月, SURGICAL NEUROLOGY, 50(1) (1), 30 - 32, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • Cerebellopontine angle ependymoma with internal auditory canal enlargement and pineal extension
    Takehiko Ueyama, Norihiko Tamaki, Takeshi Kondoh, Takashi Kokunai, Masahiro Asada
    1997年10月, Neurologia Medico-Chirurgica, 37(10) (10), 762 - 765, 英語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

  • A case of traumatic extracranial internal carotid artery dissecting aneurysm treated by proximal ligation and STA-MCA bypass
    Takehiko Ueyama, Norihiko Tamaki, Yousuke Ishihara, Kazuki Hosoi, Takeshi Kondoh, Mitsugu Nakamura, Masahiro Asada
    1997年03月, Neurological Surgery, 25(3) (3), 253 - 258, 日本語
    研究論文（学術雑誌）

  • Transsphenoidal surgery for a case of empty sella syndrome associated with GH secreting pituitary adenoma
    Hideo Aihara, Norihiko Tamaki, Takehiko Ueyama, Yousuke Ishihara, Takeshi Kondoh
    1996年12月, Neurological Surgery, 24(12) (12), 1119 - 1123, 日本語
    [査読有り]
    研究論文（学術雑誌）

■ MISC
  • めまい疾患のモデル動物-遺伝子医療・再生医療への扉 聴覚・平衡覚の成立におけるRho-GTPaseの関与
    坂口 博史, 中村 高志, 上山 健彦
    (一社)日本めまい平衡医学会, 2017年12月, Equilibrium Research, 76(6) (6), 720 - 726, 日本語

  • Cdc42による蝸牛有毛細胞不動毛の形態維持
    中村 高志, 坂口 博史, 森岡 繁文, 久 育男, 上山 健彦, 齋藤 尚亮
    耳鼻咽喉科ニューロサイエンス研究会, 2015年06月, 耳鼻咽喉科ニューロサイエンス, 29, 24 - 26, 日本語

■ 講演・口頭発表等
  • 遺伝性難聴の診断と治療法の開発～モデルマウスを用いて
    上山健彦
    第98回日本薬理学会 (APPW2025) シンポジウム, 2025年03月, 日本語
    [招待有り]
    口頭発表（招待・特別）

  • NOX由来ROSによる後天性感音難聴の発症機序（標的）と治療法開発戦略
    毛利宏明, 上山健彦
    第96回日本生化学会大会 シンポジウム, 2023年11月
    [招待有り]
    シンポジウム・ワークショップパネル（指名）

  • アクチン細胞骨格異常が関与する感音難聴の発症機序～Rho-family small GTPasesに注目
    上山健彦
    第96回日本生化学会大会 シンポジウム, 2023年10月
    [招待有り]
    口頭発表（招待・特別）

  • NADPH oxidas (Nox) 由来活性酸素種による後天性感音難聴の発症機序解明と治療法開発
    上山健彦
    第95回日本薬理学会年会 シンポジウム, 2022年03月
    [招待有り]
    シンポジウム・ワークショップパネル（公募）

  • Sensorineural hearing loss: challenges for therapy development based on its mechanisms
    Takehiko Ueyama
    The 8th Neuroscience Network in Kobe symposium, 2022年02月, 英語
    [招待有り]
    口頭発表（招待・特別）

  • 遺伝子改変マウスからの疾患病態解明と治療法開発戦略へのフィードバック
    上山健彦
    第60回日本組織細胞化学会総会 シンポジウム, 2019年09月, 日本語
    [招待有り]
    シンポジウム・ワークショップパネル（指名）

  • ヒト患者とマウスモデルから学ぶアクチン動態障害による遺伝性難聴の治療戦略
    上山健彦
    第92回日本薬理学会年会 シンポジウム, 2019年03月
    [招待有り]
    シンポジウム・ワークショップパネル（公募）

  • イメージング手法を駆使した聴・平衡覚機能障害治療法開発への挑戦
    上山健彦
    第59回日本組織細胞化学会総会 シンポジウム, 2018年09月
    [招待有り]
    シンポジウム・ワークショップパネル（指名）

  • Hearing loss causing from impaired actin dynamics: clinical implications
    Takehiko Ueyama
    International Congress of Korean Society of Otorhinolaryngology Head & Neck Surgery (ORL-HNS; ICORL 2018), 2018年04月, 英語
    [招待有り]
    口頭発表（招待・特別）

  • 脳・脊髄損傷後修復時のアストロサイトにおける新規シグナリング
    上山健彦
    第58回日本組織細胞化学会総会 シンポジウム, 2017年09月
    [招待有り]
    シンポジウム・ワークショップパネル（指名）

  • 聴毛のインテグリティ維持の破綻により発症する難聴のメカ二ズム解明
    上山健彦
    第89回日本薬理学会年会 シンポジウム, 2016年03月
    [招待有り]
    シンポジウム・ワークショップパネル（公募）

  • 生体防御に関する活性酸素産生酵素の食胞・頂側膜へのターゲティング及び会合メカニズム
    上山健彦, 齋藤尚亮
    第92回日本生理学会大会 シンポジウム, 2015年03月, 英語, 日本生理学会, 神戸, 国内会議
    [招待有り]
    シンポジウム・ワークショップパネル（公募）

  • 内耳有毛細胞におけるRhoファミリー低分子量G蛋白質の役割
    上山健彦, 齋藤尚亮
    第55回日本組織細胞化学会総会 シンポジウム, 2014年09月, 日本語, 日本組織細胞化学会, 松本, 国内会議
    [招待有り]
    シンポジウム・ワークショップパネル（指名）

  • Maintenance of stereocillia and apical junctional complexes by Cdc42 in cochlear hair cells.
    Ueyama, T, Sakaguchi, H, Nakamura, T, Goto, A, Morioka, S, Fritzsch, B, Hisa, Y, Matsuda, M, Aiba, A, Saito, N
    Society for Neuroscience 2014, 2014年09月, 英語, Society for Neuroscience, Washington D.C., USA, 国際会議
    口頭発表（一般）

  • 活性酸素産生NADPH oxidasesの食胞・頂側膜へのターゲティング及び会合メカニズム
    上山健彦
    第6回 Asia International Institute of Infectious Disease Control (ADC) 研 シンポジウム, 2014年08月, 日本語, 東京, 国内会議
    [招待有り]
    口頭発表（招待・特別）

  • Cdc42 is required for maintenance of stereocilia and apical junction complexes in cochlear hair cells
    Takehiko Ueyama
    Joint Workshop (UCL and Kobe University) in Brussels: Cell polarity and Cell adhesion, 2014年03月, 英語
    [招待有り]

  • Glial functions of Rho-family small GTPases during cerebellar development and after CNS injury
    Ueyama Takehiko, Kondoh T, Kohta M, Kohmura Eiji, Hayashibe M, Nakamura T, Sakahara M, Kassai H, Nakao K, Aiba A, Saito Naoaki
    The 14th international congress of Histochemistry and Cytochemistry (ICHC 2012), 2012年08月, 英語, 京都, 国際会議
    ポスター発表

  • 中枢神経損傷とRho family GTPases
    上山健彦, 齋藤尚亮
    第85回日本薬理学会年会 シンポジウム, 2012年03月, 英語, 日本薬理学会, 京都, 国内会議
    [招待有り]
    シンポジウム・ワークショップパネル（公募）

  • 部位特異的KOマウスを用いた低分子量Gタンパク質の組織学的機能解析
    上山健彦, 齋藤尚亮
    第52回組織細胞化学会総会 シンポジウム, 2011年09月, 日本語, 日本組織細胞化学会, 金沢, 国内会議
    [招待有り]
    シンポジウム・ワークショップパネル（指名）

  • RhoGDIによるRacの機能調節分子メカニズム
    上山健彦
    第84回日本薬理学会年会 シンポジウム, 2011年03月, 英語
    [招待有り]
    シンポジウム・ワークショップパネル（公募）

  • Translocation/dissociation mechanisms of Rac-RhoGDI complex on membranes
    Takehiko Ueyama, Son J., Kobayashi T., Saito N.
    International Symposium on Cell Signaling and Gene Regulation in Taiwan, 2011年, 英語
    [招待有り]

  • Translocation/dissociation mechanisms of Rac-RhoGDI complex on membranes
    Takehiko Ueyama, Son J., Kobayashi T., Saito N.
    Gordon Research Conferences (NADPH oxidase), 2010年, 英語

  • Dual oxidases (Duoxs) form cell surface complexes with Duox activators (Duoxas) affecting the specificity of ROS generation
    Takehiko Ueyama, Morand S., Tsujibe S., Korzeniowska A., Saito N., Leto TL
    The 24th International Union of Physiological Sciences (IUPS), 2009年, 英語

  • Sequential targeting of cytosolic phox proteins to phagosomes through regulated adaptor proteins during FcγR-mediated phagocytosis.
    Ueyama Takehiko, Kusakabe Tomoko, Karasawa Satoshi, Kawasaki Takumi, Shimizu Aya, Son Jeong-hyun, Leto L. Thomas
    第81回日本薬理学会年会, 2008年03月, 日本語, パシフィコ横浜, 国内会議
    口頭発表（一般）

  • Sequential binding of cytosolic phox complex to phagosomes through
    Ueyama Takehiko, Kusakabe Tomoko, Karasawa Satoshi, Kawasaki Takumi, Shimizu Aya, Son Jeong-hyun, Leto L.Thomas, Miyawaki Atsushi, Saito Naoaki
    Gordon Research Conference (NADPH oxidase), 2008年, 英語, ボストン, 国際会議
    ポスター発表

  • A regulated adaptor function of p40phox: intramolecular interaction (PX-PB1 domain) within p40phox.
    Ueyama Takehiko, Tatsuno Toshihiko, Kawasaki Takumi, Leto L. Thomas, Saito Naoaki
    Gordon Research Conference (Phagocytes), 2007年06月, 英語, ロードアイランド, 国際会議
    ポスター発表

  • Nox2 活性化における p40phox の p67phox に対するキャリア一蛋白としての機能獲得メカニズム: p40phox の PX-PB1 domain を介した分子内結合の切断
    上山 健彦, 辰野 敏彦, 川﨑 拓実, 辻部 智, 住本 英樹, Leto L. Thomas, 齋藤 尚亮
    第80回日本薬理学会年会, 2007年03月, 日本語, 名古屋国際会議場, 国内会議
    口頭発表（一般）

  • 貪食細胞 (Nox2) と内耳上皮細胞 (Nox3) おける活性化型 NADPH oxidase 複合体形成機構---Nox2: p40phoxのアダプターとしての機能獲得メカニズム---
    上山 健彦, 辰野 敏彦, 川﨑 拓実, Thomas L. Leto, 齋藤 尚亮
    第41回食細胞機能異常症研究会, 2006年12月, 日本語, 東京経団連会館, 国内会議
    [招待有り]
    口頭発表（招待・特別）

  • 貪食細胞における活性化型NADPH oxidase複合体形成機構の可視化---p40phoxのアダプター蛋白としての機能獲得メカニズムの解明---
    上山 健彦, 辰野 敏彦, 川﨑 拓実, 住本 英樹, Tomas L. Leto, 齋藤 尚亮
    生理研シンポジウム, 2006年10月, 日本語, 岡崎カンファレンスセンター, 国内会議
    口頭発表（一般）

  • Rac1 is an essential component for activation of multi-component Nox1-based NADPH oxidase.
    Ueyama Takehiko, Geiszt M, Saito Naoaki, Leto L.Thomas
    20th International Congress of Biochemistry and Molecular Biology (IUBMB) and 11th FAOBMB Congress, 2006年06月, 英語, 国立京都国際会館, 国内会議
    ポスター発表

  • Nox1, Nox2 and Nox3 require the involvement of Rac for their activation
    Takehiko Ueyama, Geiszt M., Leto TL
    Gordon Research Coference (NADPH oxidase), 2006年, 英語

  • Is membrane-targeting of Nox activator (Noxa1 or p67phox) enough for activation of Nox family NADPH oxidase?
    akehiko Ueyama, Geiszt M., Leto TL
    The 11th MPO meeting, 2005年, 英語

  • Analysis of isoform-specific function of PKC during phagocytosis in microglia
    Takehiko Ueyama, Lennartz MR, Kashiwagi K., Shirai Y., Sumimoto H., Sawada M., Saito N.
    The 33nd Annual Meeting of Society for Neuroscience, 2003年, 英語

  • マイクログリアの貪食細胞における脂質メッセンジャーの役割
    上山健彦
    第75回日本生化学会大会 シンポジウム, 2002年10月
    [招待有り]
    シンポジウム・ワークショップパネル（公募）

  • Fragmentation of PKN in microglia after middle cerebral artery occlusion in rats
    Takehiko Ueyama, Ren Y., Sakai N., Takahashi M., Ono Y., Kondoh T., Tamaki N., Saito N.
    The 30nd Annual Meeting of Society for Neuroscience, 2000年, 英語

■ 所属学協会
  • 米国免疫学会
    2013年 - 現在

  • 日本生化学会
    2009年 - 現在

  • 日本薬理学会
    2001年 - 現在

  • 北米神経科学会
    2000年 - 現在

  • 日本脳神経外科学会
    1992年 - 現在

■ 共同研究・競争的資金等の研究課題
  • 活性酸素産生酵素NOX3の発現制御機序解明による後天性及び片側性難聴の治療法開発
    上山 健彦, 坂口 博史, 足立 直子, 中村 高志
    日本学術振興会, 科学研究費助成事業, 基盤研究(B), 神戸大学, 2024年04月01日 - 2027年03月31日

  • 脊髄小脳変性症でのPKCリン酸化を介した神経保護機構の解明と新規治療法への応用
    白藤 俊彦, 上山 健彦
    日本学術振興会, 科学研究費助成事業, 基盤研究(C), 神戸大学, 2021年04月 - 2024年03月
    脊髄小脳変性症(SCA)患者の小脳プルキンエ細胞ではPKCリン酸化亢進が共通して起こり、小脳プルキンエ神経保護的に働くことが報告されている。 本研究の目的はSCAでリン酸化が亢進するPKCリン酸化基質やそのシグナル経路を同定し、そのPKCリン酸化経路をターゲットにしたSCA に共通して適用できる新規治療法を開発することである。 本年度は、SCAでPKCリン酸化が亢進する基質の同定を行った。第１に小脳プルキンエ細胞に発現し、SCAや神経変性疾患に重要であるタンパク質を候補として、細胞レベルでPKCによるリン酸化があるのかを同定した。SCA38、46、18 の原因遺伝子ELOVL5、PLD3、 IFRD1や、以前行った小脳をPKC刺激をして得たリン酸化プロテオームで同定した、GOLGA5、MTFR1L、 NSFL1C、TOMM70、VCP、PLEKHG4の9つのタンパク質にFLAGタグを付加した。そのプラスミドを細胞に導入し、その細胞をPKC刺激薬で処置し、pSer PKC AbでIBを行った。その結果、VCP, PLEKHG4がPKCによりリン酸化を受けることを確認した。 また、網羅的に小脳プルキンエ細胞で亢進しているPKCリン酸化基質を同定するための網羅的リン酸化プロテオームについては、マウスの全脳を用いた条件検討で、リン酸化変化の実験間の変動が大きいために脱リン酸化酵素阻害の手法を改善しているところである。

  • Nox3由来ROSによる難聴（加齢、騒音、薬剤、突発性）の発症機序解明とその先へ
    上山 健彦, 坂口 博史, 足立 直子, 中村 高志
    日本学術振興会, 科学研究費助成事業, 基盤研究(B), 神戸大学, 2021年04月 - 2024年03月
    1. 自ら開発したNADPH oxidase 3 (Nox3) 発現細胞が赤色蛍光蛋白 tdTomato で標識される（Nox3-CreKI;tdTomato+/+）マウスを用い、耳石形成に必須のNox3由来活性酸素（ROS）発生源細胞として、内リンパ嚢・内リンパ管の管腔に面した上皮細胞を特定した。更に、Nox3が一次聴覚感受器官である蝸牛コルチ器に発現することを発見、Nox3発現細胞として、内・外有毛細胞とその周囲に存在し有毛細胞を機能・構造的に支える種々の支持細胞（内・外指節細胞、外柱細胞、クラウディウス細胞）を特定した。 2. 加えて、上記の蝸牛におけるNox3発現（tdTomato陽性）細胞数が、聴毒性で有名な抗癌剤であるシスプラチンの投与および加齢や騒音不可により上昇する事を発見した。特に、Nox3が発現誘導された外有毛細胞は、アポトーシスに陥ることを明らかにした。 3.自ら開発したNox3-knockout (KO)マウスを用いて、シスプラチン誘発感音難聴、加齢性感音難聴、騒音性感音難聴において、Nox3-KOが聴覚温存に働くことを明らかにした。 4.上記3種の主要後天性感音難聴の中で、シスプラチン誘発感音難聴と加齢性感音難聴においてNox3の関与が非常に高く、騒音性感音難聴ではやや低いが有意に関与することを明らかにした。
    上記の結果は、Nox3の蝸牛コルチ器（特に、外有毛細胞細胞）での発現抑制が、後天性感音難聴の治療法開発の標的になる事を強く示唆している。

  • 視・聴覚受容の【左右差】を基盤とした疾患概念の確立を目指して
    上山 健彦, 坂口 博史
    日本学術振興会, 科学研究費助成事業, 挑戦的研究(萌芽), 神戸大学, 2019年06月 - 2022年03月
    蝸牛及び網膜での活性酸素産生能力を経時的に（生後2週間から1年まで）観察した。 蝸牛及び網膜での活性酸素産生能力は2～6か月齢で最大となり、その後はプラトーになることを発見した。更に、蝸牛及び網膜での活性酸素産生能力は、加齢や聴力及び視力に対して毒性を有する抗癌剤であるシスプラチンによって増強されることを明らかにした。この際に、蝸牛では外有毛細胞が、網膜では視神経節細胞が脱落することを突きとめた。これらの発見は、活性酸素により起こる疾患が、ヒトでは壮年期に最も起こり易いのではないかということを示唆するものであった。

  • ゲノム編集を用いた新規的内耳遺伝子導入法の開発
    坂口 博史, 瀧 正勝, 上山 健彦
    日本学術振興会, 科学研究費助成事業, 基盤研究(C), 2018年04月 - 2021年03月
    感音難聴に対する分子標的医療の開発を目指した研究を行った。まずエレクトロポレーション法により内耳の感覚細胞に対する遺伝子導入が可能であることを示した。また、治療対象となる内耳性難聴についてモデルマウスを作成し、分子病態および原因遺伝子の発現と機能を解析した。その結果、Dia1が有毛細胞のシナプスおよび有毛細胞の不動毛におけるアクチン代謝を制御していること、筋ジストロフィーが蝸牛神経の軸索形成の髄鞘化不全をきたし難聴を生じうること、NOX3が蝸牛内でのROS産生を介して加齢性、騒音性、薬剤性など様々な内耳障害に関与することを明らかにした。これらの分子は将来的に内耳分子標的治療の候補になりえる。

  • CSPaリン酸化による神経終末保護作用に着目した新規パーキンソン病治療法の開発
    白藤 俊彦, 齋藤 尚亮, 上山 健彦
    日本学術振興会, 科学研究費助成事業, 基盤研究(C), 神戸大学, 2018年04月 - 2021年03月
    CSPaのSer34リン酸化抗体(CSPa pS34抗体）を作製し、CSPa pS34抗体が 実際に特異的にSer34リン酸化を同定できることを確認した。マウス全脳から抽出したCSPaにおいて、CSPa pS34抗体によりバンドが検出された。一方、免疫組織染色では本抗体は機能しなかった。rTHp promoter制御下にCSPa-WT, リン酸化欠損（SA）, リン酸化模倣（SD）, H43Qの４つのAAV PHP.eBを作製した。眼窩静脈叢経由での投与により、黒質線条体での発現を確認した。現在内在性のCSPとの発現比率を検証中である。

  • 齋藤 尚亮
    日本学術振興会, 科学研究費補助金, 基盤研究(B), 神戸大学, 2017年04月 - 2020年03月
    脊髄小脳変性症14型（SCA14）の原因となる変異型PKCgammaをモデルとして、凝集体形成を原因とする神経変性症の治療薬の開発を、特に分子シャペロンの機能に着目して行った。 Hsp70の発現誘導作用を有し、脳内移行性の高い薬剤Hsp990は初代培養小脳プルキンエ細胞において、Hsp70発現を誘導し、変異型PKCgammaの凝集体形成を抑制した。さらに、SCA14モデルマウスにおいても、Hsp990は経口投与により変異型PKCgamma凝集体を減少させた。これらの薬物をリード化合物としたHsp発現誘導化合物がSCA14の治療薬、さらには多くの神経変性症の治療薬となりうることが示された。
    競争的資金

  • 上山 健彦
    日本学術振興会, 科学研究費補助金, 基盤研究(B), 神戸大学, 2017年04月 - 2020年03月, 研究代表者
    1. 作製したDIA1変異体発現マウスに音響暴露を行うと、有毛細胞内のリボンシナプスが有意に減少した。つまり、DFNA1患者での進行性難聴が、後天性負荷によることが解かった。 2. DIA1変異体発現では、DIA1変異体が頂側結合に局在することを明らかにした。透過電顕微観察では、変異体発現マウスの有毛細胞頂側結合に形態異常が存在した。つまり、DFNA1の主要病変部位が有毛細胞頂側結合であることを解明した。 3. DIA1変異体発現マウスの経時的血球解析を行った。加齢により、血小板径にバラツキが顕在化してくる傾向が捉えられた。異常が出現する時期や機序については、現在、詳細を解明している。
    競争的資金

  • 上山 健彦
    日本学術振興会, 学術研究助成基金助成金／基盤研究(C), 基盤研究(C), 神戸大学, 2014年04月 - 2017年03月, 研究代表者
    （1）内耳有毛細胞特異的Cdc42-KOマウスを作製し、「KOマウスが正常聴覚獲得後に聴毛形態異常による進行性感音難聴を呈する」、「Cdc42は聴毛の維持期に機能する」、「Cdc42は聴毛膜に局在し、活性化は聴毛上半部に強い」事を発見した。 （2）更に「Cdc42-KO/KDによるRhoAシグナリング亢進」を見出した。RhoAの下流にはアクチン重合分子DIA1が存在する。そこで、原因不明難聴1120患者のエキソーム解析を行い、新規DIA1点変異をもつ遺伝性感音難聴の2家系（本邦）を発見した。加えて、この変異体発現マウスが、患者病態を再現し、高音域から始まる進行性感音難聴を呈する事を明らかにした。
    競争的資金

  • 齋藤 尚亮
    日本学術振興会, 学術研究助成基金助成金／挑戦的萌芽研究, 挑戦的萌芽研究, 神戸大学, 2014年04月 - 2016年03月
    Racを介したケラチノサイトから脂肪細胞への分化・誘導シグナリングの同定とその機構の詳細の解明を行った。ケラチノサイトからRacの活性化により分泌される因子5つ（a,b,c,d,e）を、DNAマイクロアレイによるスクリーニングとRT-PCRにより同定した。更に、a+b, a+cの組み合わせ刺激をした場合には、a, b, cの単独刺激に比し劇的に脂肪細胞への分化が促進される事を、未分化中胚葉細胞3T3-L1細胞を用いた実験により見出した。これらの脂肪分化シグナルが白色脂肪細胞あるいは褐色脂肪細胞へのシグナルであるかを検討し、糖・脂質代謝障害の治療薬の開発につなげるたい。
    競争的資金

  • 齋藤 尚亮
    日本学術振興会, 科学研究費一部基金／基盤研究(B)特設, 基盤研究(B), 神戸大学, 2013年04月 - 2016年03月
    パーキンソン病治療薬の開発を目指し、線条体におけるPKCgの基質の同定を行った。 その結果PKCリン酸化モチーフを持つタンパク質、Connexin-43, Disk1, MADD, CSPa, Calnexin, Stathmin, bPIX, NogoA, Adducinを同定した。さらに、①bPIXはPKCgによりSer583, Ser340がリン酸化を受けDA遊離に関与すること②Connexin-43, MADD, Calnexin, Adducinもそのリン酸化がドパミン遊離の調節に関与すること③PKCgによるCSPaのSer10リン酸化は細胞生存について重要であることを示した。
    競争的資金

  • 齋藤 尚亮
    日本学術振興会, 学術研究助成基金助成金／挑戦的萌芽研究, 挑戦的萌芽研究, 神戸大学, 2011年 - 2012年
    本研究では、p40phoxの遺伝子異常によるCGD腸炎とクローン病の発症機序のベースは共通ではないかという仮説のもと、新しいクローン病の病因の探索することにより全く新しい治療法の開発を目指した。その結果、6例の乳・幼児期発症治療抵抗性 (難治性)クローン病患者について、p40phoxを含むすべてのタイプのCGD患者を鑑別できる我々の活性酸素アッセイ法と遺伝子解析を用いて精査を行ったが、p40phox遺伝子異常によるCGD腸炎患者を発見することは出来なかった。
    競争的資金

  • 上山 健彦
    日本学術振興会, 科学研究費補助金／基盤研究(C), 基盤研究(C), 神戸大学, 2010年 - 2012年, 研究代表者
    1.活性酸素を産生する遺伝子操作マウスを作製し、このマウスが騒音性難聴を呈し、この難聴発症が活性酸素消去剤により改善することを発見した。 2.難聴を呈するノックアウトマウスの作製に成功した。現在、その難聴の発症分子メカニズム解明中である。
    競争的資金

  • 二国間交流「活性酸素種(ROS)特異的プローブの開発とDuoxによるROSメカニズムの解明」
    上山 健彦
    二国間交流事業（ハンガリーとの共同研究）, 2012年, 研究代表者
    競争的資金

  • 齋藤 尚亮
    日本学術振興会, 科学研究費補助金／基盤研究(B), 基盤研究(B), 神戸大学, 2010年 - 2011年
    SCA14およびパーキンソン病の発症メカニズムに関するPKC□の働きについて細胞レベル・個体レベルでの解析を行った。その結果、(1)変異型PKC□はプルキンエ細胞内でアミロイド繊維状の凝集を形成すること、これらアミロイド形成はトレハロースによりを抑制されることを見出した。(2) PKC□の機能低下がパーキンソン病発症に関与する可能性が示された。その原因としてドパミン遊離の抑制と黒質のドパミン細胞数の減少が考えられた。
    競争的資金

  • 二国間交流「活性酸素種(ROS)特異的プローブの開発とDuoxによるROSメカニズムの解明」
    上山 健彦
    二国間交流事業（ハンガリーとの共同研究）, 2011年, 研究代表者
    競争的資金

  • 上山 健彦
    日本学術振興会, 科学研究費補助金／特定領域研究, 特定領域研究, 神戸大学, 2008年 - 2009年, 研究代表者
    【研究の背景と目的】貪食細胞により貪食された微生物は、細胞膜と細胞内膜器官の膜成分により形成される食胞膜に取り込まれ、食胞膜上で形成されるNADPH oxidase(Nox)の機能的複合体形成により産生される活性酸素種により殺菌・消化される。貪食細胞におけるNoxであるNox2の機能的複合体は、細胞膜成分であるcytochrome b_<558>と4つの細胞質成分(p47^, p67^, p40^, Rac)により成る。このように、食胞は、複数の細胞内コンパーメントが、個々の独立した機序により集合し、貪食時に食胞膜で始めて機能を発現する"活性酸素産生トランスポートソーム"と見なし得る。本研究は、この"活性酸素産生トランスポートソーム"の分子構成、脂質-蛋白質結合、時空間動態、複合体形成にかかわる分子間相互作用を解析することにより、膜上でのNoxの活性化型複合体による活性酸素を産生するメカニズムの解明を目指すものである。 【研究方法・研究内容】(1)p40^の構造変化を誘導する生理的機構のイメージング解析、(2) RhoGDI分子種による活性酸素産生制御機構のイメージング解析 を行った。 【研究結果】1. 生細胞を用いて、共焦点レーザー顕微鏡下での可視化により、刺激時にp40^の構造変化が起こるメカニズムとp40^がNox2の活性化促進因子として機能するメカニズムについて解明した。2. RhoGDI分子種の違いにより活性酸素産生抑制能力に違いがあることを突きとめ、そのメカニズムが、RhoGDI-Rac複合体の膜ターゲット様式の違いに起因することを明らかにした。これらの両研究成果については、現在論文作成中である。
    競争的資金

  • 上山 健彦
    日本学術振興会, 科学研究費補助金／基盤研究(C), 基盤研究(C), 神戸大学, 2007年 - 2008年, 研究代表者
    近年、上皮細胞における活性酸素の産生が報告され、続いて組織特異的に存在する新規NADPH oxidase(Nox: 7種類) が確認され、その生理機能やその機能異常によって引き起こされる疾患などに注目が集っている。本研究では、新規Noxの活性化機構の詳細を、遺伝子操作マウスや操作マウス由来の細胞などを用いて解明することを試みた。 その結果、 1. 生細胞を用いて、共焦点レーザー顕微鏡下で、可視化により蛋白質相互作用を検知できる新規蛍光蛋白質システム(complementation-based method using a monomeric coral fluorescent protein: mKG system)を開発し、その有用性をNox複合体の相互作用を用いて証明し、報告した。 2. 遺伝子操作マウス由来の初代培養細胞とレンチウイルスを用いた Nox の再構築系の確立に成功した。
    競争的資金

  • 齋藤 尚亮
    日本学術振興会, 科学研究費補助金／基盤研究(B), 基盤研究(B), 神戸大学, 2007年 - 2008年
    脊髄小脳変性症14型の発症メカニズムとして、変異型PKCγには細胞膜に十分な時間存在する能力が欠如しTRPCチャネルをリン酸化することができないため細胞外からのCa^<2+> 流入を抑制する機構が働かないことを示した。この過剰なCa^<2+> 流入が神経細胞死が招くと推測された。また他の要因として初代培養プルキンエ細胞において変異型PKCγは凝集体の形成・樹状突起の伸展・シナプス形成異常を引き起こす事を示した。
    競争的資金

  • 齋藤 尚亮
    日本学術振興会, 科学研究費補助金／特定領域研究, 特定領域研究, 神戸大学, 2006年 - 2007年
    脳虚血障害は発症後、現有の最高の治療法を用いても重度の障害を残す例は多くあり、新たな治療法の開発が期待されている。我々は、エストロゲンが細胞膜型エストロゲン受容体を介して神経細胞特異的なプロテインキナーゼCであるγPKCを活性化することにより、虚血後においても神経保護作用を示すことを見出した。一方、グリア細胞に発現するδPKCは、そのノックアウトマウスにおいて明らかな虚血巣の縮小が見られることから、γPKCと異なり神経障害作用を示すと考えられている。我々は、脳虚血による神経障害からの保護作用を示すエストロゲンの作用機序に着目し、この神経保護作用に対する神経、グリアそれぞれの独立した関与、およびニューロンーグリアのネットワークの役割について検討してきた。 今回、脳虚血時に神経細胞保護的に作用する細胞膜型エストロゲン受容体を新たに同定した。この細胞膜型エストロゲン受容体は、G蛋白質結合型受容体であり、エストロゲンによる神経保護作用に必須であるPKCγの活性化とともに、細胞内カルシウム濃度上昇を導くものであつた。また、本受容体は脳内に広く分布していることも免疫組織化学的に明らかにした。従来知られていた細胞質型とは異なる細胞膜型のエストロゲン受容体の研究は、性ステロイドのシグナル伝達機構の解明にとどまらず、脳虚血障害の新治療薬の開発につながると考えられる。
    競争的資金

  • 上山 健彦
    日本学術振興会, 科学研究費補助金／若手研究(B), 若手研究(B), 神戸大学, 2005年 - 2006年, 研究代表者
    非貧食細胞及び貧食細胞における活性酸素産生の制御機構の解明を行った。 1)貧食作用時におけるp47^-p67^-p40^複合体の食胞膜への移行メカニズムをp40^に注目して行った。p40^が、それ自身では膜移行能を持たないp67^を食胞膜に移行させる"アダプター蛋白"として機能すること明らかにした。さらに、p40^がアダプター蛋白として機能するメカニズムは、p40^の分子内結合(PX-PBI)の切断による、PI(3)Pに特異的結合能を持つPXdomainの露出ためであることを見出し、世界に先駆けて報告した。 2)非貧食細胞(上皮細胞)における活性酸素産生機構の解明に取り組み、酵素本体であるNADPH oxidase(Nox)の新規ホモログであるNox1とNox3の活性化機構の詳細とその活性化にはRac1が必要であることを見出し、世界に先駆けて報告した。 3)さらに、非貧食細胞(上皮細胞)における活性酸素産生機構の解明において、Noxを活性化する細胞質因子Noxo1(貧食細胞における細胞質因子であるp47^の上皮細胞におけるホモログ)の4種のアイソザイムの機能発現機構の詳細を報告した。 4)貧食作用時において貧食作用自体を制御する因子として、我々が報告しているePKCの食胞膜への集積機構の詳細を報告した。 5)貧食作用時におけるRacの食胞膜への集積機序について、Rac2は直接食胞膜に移動するのではなく、まず細胞内器官膜に移動し、その器官がRacが持つ器官移動促進作用を利用して食胞に癒合することにより、異物を包むのに必要な膜成分とRac自身の両方を食胞に供給するという、新説を提唱し報告した。
    競争的資金

  • 齋藤 尚亮
    日本学術振興会, 科学研究費補助金／基盤研究(B), 基盤研究(B), 神戸大学, 2005年 - 2006年
    近年、脂質分子の細胞内での産生や動態を、特異的な脂質結合蛋白質あるいはそのドメインを用いて解析することが可能となり、細胞機能調節における脂質メッセンジャーの機能解明の糸口が開かれてきた。本研究では、脂質シグナリングが「いつ」「どこで」行われるかを解析することにより、脂質メッセンジャーの産生、移動、それによる情報伝達を秒単位で解析することを目的とした。その結果、以下の成果を得た。 1)ドン食細胞における脂質メッセンジャーシグナリングの時間的・空間的解析を行い、情報伝達因子や活性酸素酸性関連分子(PKC、Rac p47^,p40^など)がドン食時に、食胞膜にトランスロケーションし、活性酸素の産生などに関与することを示し、その動態を制御するメカニズムについて分子レベルで解明した。また、脂質結合能の違いにより、これら因子は異なるタイミングで異なる部位に巧妙にターゲティングし、活性酸素産生機構を制御していることを明らかにした。 2)ジアシルグリセロール(DG)-プロテインキナーゼC(PKC)-DGキナーゼ(DGK)について、時間的空間的に機能連関を検討した。つまり、(1)DGKgaminaがgammaPKCの活性依存的にアクセサリードメイン(AD)を介してgammaPKCと直接結合すること、(2)AD内の776番目と779番目のセリンがgammaPKCによってリン酸化され、これによりDGKgammaの活性が亢進すること、(3)さらに、DGKgammaADを強発現させることにより、gammaPKCのリトランスロケーションが抑制されることも明らかになった。これらの事実は、機能的に連関する2つの酵素の局在及び活性が実に巧妙に調節・制御されていることを示した。 3)DGKgammaが様々な細胞において細胞質から核内に移行すること、この核内移行にはキナーゼ活性は必要ではなく、脂質結合領域であるC1ドメインが核移行シグナルとして機能していることを明らかにした。さらに、核内のDGKgammaは細胞周期に関与していることを明らかにした。 4)gammaPKCの変異により発症する小脳脊髄変性症(Spinocerebellar ataxia : SCA14)について、PKCの機能異常との関連について解析した。その結果、PKC変異による凝集体形成の促進が関与することが示唆された。
    競争的資金

  • 齋藤 尚亮
    日本学術振興会, 科学研究費補助金／特定領域研究, 特定領域研究, 神戸大学, 2005年 - 2005年
    貪食細胞での微生物の殺菌は、Noxの細胞膜成分(cytochromeb558)と4つ細胞質成分(p47phox,p67phox,p40phox,Rac)により構成されるNADPHoxidase(Nox)に由来する活性酸素種により行われる。本研究は、この厳密に制御された活性酸素産生の分子機構を、機能蛋白質特にPKCおよびRacに焦点を当て、リアルタイムで可視化することにより解明することを目的とした。【今年度の成果】(1)Rac分子種の貪食IgGビーズへの集積度に違いがあることを見出した(Rac1>Rac3>Rac2)。この違いは、C末側の塩基性配列(PB)の違いに依存することを、イメージング解析により示した。また、protein-lipid overlay assayにより、この領域に脂質結合特異性があることを示した。さらに、Rac分子種のPBを入れ替えたキメラ蛋白を用いることにより、各分子種のPBの活性酸素産生に果たす重要性を明らかにした。また、Rac2の活性型変異体(Rac(Q61L))の集積を観察すると、小胞体などの細胞内器官の膜に局在し、貪食時にそれらの小器官膜が線状に貪胞膜へ癒合するのが観察された。(2)GFP融合PKCを貪食細胞に発現させIgGビーズを貧食させると、7種のPKC分子種の中beta I-PKCとepsilon-PKCのみが食胞に集積する。その結果、貧食時のepsilon-PKCの集積は、そのC1BドメインにPLC-gamma1経由で形成されるdiacylglycerol(DAG)が結合することにより起こることを明らかにした。【考察】(1)Rac1は貪食時にPBの高い正電荷とその脂質結合能を利用し食胞膜に集積する。Rac2はPBの正電荷を利用した弱い集積機序の他に、まず細胞内器官膜にターゲットし、この膜が貪胞膜に融合することを利用した、PBの正電荷に依存しない集積機序を持つことがわかった。これらのことから、3種すべてのRac分子種が活性酸素産生に関与する能力を有するが、マクロファージではRac1が、白血球ではRac2が優位に関与することが推察された。(2)同じC1BドメインをもつPKC分子種の中でも、特にepsilon-PKCが、貪食時食胞に強く集積することは、C1Bの脂質結合性の違いがPKCの分子種特異的シグナリングに重要な役割を果たしていることが推察された。
    競争的資金

  • 白井 康仁
    科学研究費補助金／特定領域研究, 2005年
    競争的資金

  • ファゴサイトーシス時に働くシグナルカスケードのリアルタイム解析
    上山 健彦
    日本学術振興会, 科学研究費助成事業, 若手研究(B), 神戸大学, 2003年 - 2004年
    Fcγ receptorを介したファゴサイトーシス時におけるシグナルカスケードの解明を、PKC分子種、Diacylglycerol kinase (DGK)分子種にGFPを標織しmicrogliaに発現させ、IgGで標識したビーズを貪食させ、共焦点コンフォーカル顕微鏡下でリアルタイム観察することにより行った。 1,PKC分子種の中でβIPKCとεPKCのみが、食胞膜に限局して一時的に集積すること、この2種の集積様式が異なっていることをつきとめた。さらに、βIPKCの集積機序の詳細な解明に努め、βIPKCは食胞膜で限局的に産生されるdiacylglycerolとオシレーションを伴う細胞内のカルシウムの上昇により、オシレーションを伴って食胞膜に限局的に集積することがわかった。 2,βIPKCのファゴサイトーシス時における機能を解明するため、カルシウム依存性PKCの選択的阻害剤を用いて、Fcγ receptor刺激時の活性酸素産生を測定した。活性酸素の産生を(1)細胞外への活性酸素産生、(2)食胞内への活性酸素産生に分けて考えると、(1)はβIPKCに完全に依存したが、(2)は部分的に依存していた。 3,さらにPKCの機能を調節していると考えられるDGKのなかでカルシウム依存性のある分子種に注目したところ、DGKβのみがファゴサイトーシス時に集積した。活性酸素の産生は、DGK選択的阻害剤で処置すると、特に細胞外への活性酸素産生が著名に増加した。さらにこの阻害剤処置時のβIPKCの集積は著名に増強した。以上のことから、Fcγ receptorを介したファゴサイトーシスにおいて、細胞外への活性酸素の産生は、βIPKCにより制御されており、その調節をDGKβが行っていることがわかった。 4,さらにβIPKCの基質であるp47^も食胞膜に限局的に集積することをつきとめた。以上のことから、Fcγ receptorを介したファゴサイトーシス時における活性酸素の産生は、食胞で限局するように厳密に制御されていることが推測された。そこで電子顕微鏡を用いてFcγ receptorを介したファゴサイトーシス時における活性酸素の産生部位を検索したところ、食胞に限局していた。 以上の成果は、現在投稿中である。

研究シーズ

■ 研究シーズ
  • 後天性感音難聴に対する治療薬の開発
    シーズカテゴリ：ライフサイエンス
    研究キーワード：加齢（老人）性難聴, 騒音性難聴, 薬剤性難聴, 活性酸素, ROS
    研究の背景と目的：感音難聴（内耳有毛細胞以降、一次聴覚野に至るまでの経路障害）は、感覚障害中最多の疾患（世界人口の約5% が何らかの聴覚障害に罹患）ですが、根本治療法がない難病です。2019年にはWHOが、若者の約半数（11 億人）がスマートホン等による大音量の過剰な暴露によって、将来的な騒音性難聴のリスクに晒されていると提言しました。私達は、感音難聴、特に後天性感音難聴に対する世界初の治療薬開発を目指しています。
    研究内容：種々の遺伝子改変マウス（新規作製及び既存）を用いて難聴・めまいの発症メカニズムを解明し、マウスで得られた知見をヒトでの臨床研究によって証明しています。これらの研究で得られた知見を基に、世界初の難聴治療薬開発を最終目標として、精力的に取り組んでいます。標的とする感音難聴は、遺伝性に加え、後天性難聴です。特に、後天性難聴では、患者数が最も多い加齢性難聴（65歳以上の25~40%が罹患し、本邦のみでも約1000万人の患者さんが存在します）に注目して、活性酸素種（ROS）の産生を抑制するとの観点から、治療薬の開発に取り組んでいます。
    期待される効果や応用分野：世界初の感音難聴治療薬の開発。 高齢者のQOLの向上。 社会全体としての有効生産性の向上。
    関係する業績：Mohri他 Nox3-derived superoxide in cochleae induces sensorineural HL (SNHL). J Neurosci. 2021 Ueyama他 Constitutive activation of DIA1 via C-terminal truncation causes human SNHL. EMBO Mol. Med. 2016
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